Efeito da proteína anti-inflamatória anexina A1 nas células epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19) após ativação pelo inflamógeno lipopolissacarídeo.

Resumo

A inflamação é o principal fator contribuinte para inúmeras desordens oculares, podendo levar à diminuição da acuidade visual, e até mesmo à cegueira. Em geral, nos tratamentos dessas inflamações intra-oculares são os glicocorticóides os medicamentos freqüentemente administrados. No entanto, os efeitos colaterais destes fármacos, como a elevação da pressão intraocular, cataractogenese e citotoxidade às estruturas da retina, limitam os seus usos. Devido a estas restrições, existe uma demanda óbvia para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. As nossas investigações, administrando a anexina A1 (ANXA1), têm mostrado a participação ativa desta proteína nos processos inflamatórios, sendo a porção N-terminal (peptídeo Ac2-26) promotora da ação anti-inflamatória. Contudo, a expressão da ANXA1 em tecidos oculares normais e/ou inflamados tem sido pouco estudada. Por essas razões, o nosso estudo tem como objetivos investigar, in vitro, a expressão e sub-localização da ANXA1 endógena nas células ARPE-19 (derivada do epitélio pigmentado da retina humana normal) após ativação pelo lipopolissacarídeo bacteriano (LPS), e o possível efeito anti-inflamatório da administração da ANXA1 nessas células. Inicialmente, as células ARPE-19 serão cultivadas em meio DMEM:F-12 na concentração de 104células/35mm por amostra e estimuladas pelo LPS. Em um outro experimento, as células serão ativadas pelo LPS e tratadas com o peptídeo Ac2-26 (concentração de 2 mM), especificamente para avaliar o possível efeito anti-inflamatório da ANXA1. Ambas as investigações serão realizados nos tempos de 30, 60, 120, 240 minutos e 24 horas. Em seguida, as células somente ativadas pelo LPS serão processadas para as análises da expressão da COX2 e ANXA1 endógena pelos métodos imuno-histoquímico e imunocitoquímico ultra-estrutural, respectivamente. Os sobrenadantes serão coletados para as dosagens das citocinas pró-inflamatórias TNF-±, IL-1², e NO. Após os tratamentos LPS/ANXA1, a expressão da COX-2 também será avaliada nas células e as mesmas citocinas relacionadas serão dosadas nos sobrenadantes. As investigações serão realizadas tendo em vista as aplicações da proteína ANXA1 como uma alternativa terapêutica ocular.