Estudo dos eventos relacionados à ativação imediata da via dectina-1 em deficiência de AIRE

Resumo

A Poliendocrinopatia Autoimune Associada à Candidíase e Distrofia Ectodérmica é uma síndrome caracterizada pela presença de autoanticorpos específicos para diversos antígenos naturalmente existentes no corpo humano, o que leva a doenças autoimunes além de uma elevada suscetibilidade a infecções crônicas e recorrentes por Cândida albicans. Embora a doença autoimmune possa ser explicada por defeitos no timo, a suscetibilidade a candidíase ainda permanece obscura. Recentemente nosso grupo demonstrou que a Proteína AIRE é importante para a via de sinalização da Dectina-1, crítica para a resposta a C, albicans, sendo que a ausência de AIRE leva a ativação defeituosa do fator transcricional NF-kB. Também demonstramos que AIRE interage com as principais moléculas que compõem a via de sinalização da Dectina-1. No presente trabalho, propor mos avaliar como a ausência da proteína AIRE influencia eventos específicos e importantes relacionados ao estímulo da via Dectina-1, especificamente a fosforilação de proteínas, formação do complexo CARD9/BCL10/MALT1 e a degradação do Ik-B alfa. Para isso faremos os seguintes estudos: 1- Transfectar células THP-1 tornando-as deficientes em AIRE usando a técnica de shRNA ; 2-Avaliar a fosforilação de Syk e CARD9 por meio de imunoprecipitação e WB; 3- Avaliar a formação do complexo CARD9/BCL10/MALT1 por meio de imunoprecipitação e WB ; 4- Avaliar a degradação do Ik-B alfa por meio de WB. As células transfectadas na etapa 1 serão estimuladas nas etapas 2 e 4 com Curdlan, um agonista especifico para Dectina-1. Tais estudos pretendem contribuir para o avanço do conhecimento sobre os eventos relacionados à ativação via Dectina-1, os possíveis mecanismos moleculares pelos quais a proteína AIRE interage com esta via, e finalmente melhor compreender a resposta imune inata a C. albicans. (AU)