Desenvolvimento de ferramentas para a expressao genica em cafe (coffea arabica): caracterizacao de promotores tecido-especificos e ubiquos.

Resumo

A disponibilidade de promotores tecido-específicos responsáveis pela regulação de genes responsivos a estresses bióticos e abióticos constitui uma ferramenta fundamental para aplicação em programas biotecnológicos que visam o incremento da resistência e tolerância. Objetivando identificar promotores capazes de dirigir a expressão de transgenes em órgãos/tecidos específicos, nosso grupo isolou, e caracterizou parcialmente, dois genes de café (Coffea arábica) e suas respectivas regiões promotoras - o primeiro, que codifica uma peroxidase (CaPOX), apresenta expressão específica em raiz, e o segundo, que codifica uma proteína similar as isoflavona redutases (CaIRL), apresenta expressão em folha, sendo ambos induzidos por estresse abiótico e/ou biótico. A região promotora do gene CaIRL apresenta vários dí-elementos do tipo W-box repetidos em seqüência, os quais constituem prováveis alvos de ligação por fatores de transcrição do tipo WRKY. Os membros da família WRKY são fatores de transcrição envolvidos em muitos processos fisiológicos de plantas, incluindo respostas de defesa. A fim de determinar a funcionalidade dos motivos W-box presentes nesse promotor e identificar elementos /raw-atuantes possivelmente associados a ele, ensaios de mobilidade em gel e experimentos empregando o sistema mono-híbrido de levedura serão realizados. Em paralelo será realizada a análise funcional do promotor do gene CaPOX, específico de raiz, através de ensaios de expressão transiente bem como a caracterização da expressão desse gene em reposta a estresse biótico (infecção por nematóides). Num enfoque mais aplicado, o presente projeto propõe ainda clonar e testar funcionalmente promotores de café com padrões definidos de expressão (fruto-específico e ubíquos). (AU)