Prospecção de biossurfactantes a partir de microbiota de manguezais

Resumo

Embora o mangue seja um ambiente rico em diversidade microbiana, existem poucos estudos sobre esse tema no Brasil, tornando imperativo o conhecimento e a exploração de novos micro-organismos e seus metabólitos neste ecossistema. Os micro-organismos que vivem nesse ambiente são considerados extremófilos, uma vez que a as condições presentes são de alta salinidade, variação de pH e baixo teor de oxigênio. A prospecção da diversidade microbiana em ambientes inóspitos, extremos e/ou pouco explorados, como os manguezais, potencializa as chances de sucesso na busca por novas moléculas bioativas, contribuindo para uma indústria mais econômica e sustentável. Entretanto, sabemos que embora as técnicas de cultivo tenham sido aprimoradas e tenham permitido a recuperação in vitro de um número crescente de micro-organismos ainda não cultivados, nosso conhecimento sobre sua ecologia permanece insuficiente para cultivar a maioria deles. Neste contexto, as bibliotecas metagenômicas surgem como uma ferramenta poderosa para acessar de maneira mais abrangente a diversidade microbiana total em um dado ambiente, permitindo a análise de genes funcionais de membros da microbiota, principalmente de micro-organismos não-cultivados, e a descoberta de novos compostos bioativos. O objetivo desse trabalho é realizar a triagem de uma coleção de bactérias e de bibliotecas de clones metagenômicos provenientes de sedimentos de manguezais na busca de biossurfactantes com uso potencial em processos biotecnológicos, como biorremediação de áreas impactadas por petróleo e derivados. Além disso, será realizada a subclonagem para a caracterização genética e química dos compostos obtidos. As bibliotecas metagenômicas, assim como as bactérias isoladas, serão submetidas a ensaios funcionais de alta eficiência buscando a atividade surfactante. Também será avaliada, através de ensaios de similaridade de sequência (amplificação por PCR), a presença de genes nas bibliotecas que, por incompatibilidade com o sistema de clonagem/vetor/hospedeiro, não se expressam adequadamente no sistema utilizado, inviabilizando a detecção de atividade. Os clones que apresentarem expressão da atividade surfactante serão subclonados visando o sequenciamento para a caracterização do operon, assim como a super-expressão, purificação e caracterização química do composto.