Caracterização do efeito do BDS 391, um composto analgésico, sobre receptores 5-HT3 e canais iônicos

Resumo

As anêmonas do mar utilizam rico complexo protéico para capturar suas presas e se defender de predadores. A peçonha destes animais contem neurotoxinas (3-5 kDa), com ação em canais iônicos específicos, e hemolisinas (18-20 kDa), que atuam formando poros em membranas. Além destas toxinas, tem sido também detectadas, no veneno destes animais, compostos não peptídicos, de baixo peso molecular; no entanto, pouco se conhece sobre a atividade biológica destas substâncias. Recentemente, foi demonstrado, pelo nosso grupo, que a Bunodosina 391 (BDS 391), um composto de baixo peso molecular isolado da peçonha da anêmona do mar Bunodosoma cangicum, induz potente efeito antinociceptivo periférico, em modelos experimentais de dor aguda e persistente. Ensaios farmacológicos mostraram que a atividade analgésica do BDS 391 é mediada pela ativação de receptores serotoninérgicos 5-HT3 periféricos. O BDS 391 é um composto bromado, de aproximadamente 400 Da, formado por um núcleo molecular semelhante a serotonina (5-HT), conectado, por meio de uma ligação peptídica, a uma histidina. A semelhança estrutural com a 5-HT e o envolvimento de receptores 5-HT3 no efeito antinociceptivo deste composto, torna de especial interesse a ampliação da caracterização dos mecanismos moleculares envolvidos na ação do BDS 391. Assim, o presente projeto de pesquisa visa ampliar a caracterização dos mecanismos moleculares envolvidos na ação do BDS 391, investigando: (a) a interação deste composto com os receptores 5-HT3, por meio de estudos de co-localização com os receptores 5-HT3 presentes em neurônios do gânglio da raiz dorsal de ratos, e a possível internalização e tráfego do BDS 391 nestas células, utilizando ensaios de imunofluorescência; (b) se, na vigência de inflamação/lesão tecidual, ocorre alteração na expressão gênica e protéica de receptores serotoninérgicos 5-HT3 (neurônios da pata e no gânglio da raiz dorsal) e se esta alteração favorece a ação do BDS 391 neste receptor; (c) o tipo de interação do BDS 391 com receptores 5-HT3 e o possível sitio de ligação a estes receptores, por meio de estudos de ligação e de modelagem molecular e (d) por meio de ensaios eletrofisiológicos, a ação deste composto sobre correntes iônicas em canais 5-HT3 expressos em ovócitos de Xenopus laevis, e sobre correntes iônicas em neurônios do gânglio da raiz dorsal, com o intuito de caracterizar os possíveis mecanismos moleculares envolvidos na sua ação.