Estudo de sondas orgânicas e estratégias de marcação fluorescente de DNA: da fotoquímica básica à microscopia óptica de super-resolução

Resumo

O estudo de novas sondas fluorescentes é de fundamental importância para a aplicação em métodos avançados de microscopia óptica. Nesta pesquisa propomos o estudo fotofísico de uma série de compostos bisarilados derivados do anidrido maleico e de maleimidas sintetizados pela reação de Heck-Matsuda. A dinâmica do estado excitado desses compostos remete ao efeito push-pull, em que há um deslocamento de carga notável, sendo boas sondas para sistemas biológicos, polímeros e coloides. A segunda vertente desta pesquisa concerne ao estudo de uma metodologia ótima para a marcação fluorescente de DNA em sequência específica, através de microscopia de fluorescência com super-resolução. As reações foram conduzidas utilizando uma metodologia de marcação de duas etapas. Nesta metodologia, um grupamento funcional é inserido ao DNA por transferência enzimática e, em seguida, é realizado o acoplamento do fluoróforo aos sítios funcionais do plasmídeo através de reações químicas bioortogonais. Para acompanhar o desempenho das reações foi desenvolvido um ensaio single-molecule para a contagem do número de moléculas de corante ligadas a plasmídeos individuais bem como a obtenção de imagens de Microscopia de Força Atômica (AFM) para checar a morfologia dos plasmídeos. Propomos ainda a utilização de compostos ciclizados derivados do anidrido maleico como corantes intercaladores de DNA e a investigação desse sistema por microscopia óptica de super-resolução. (AU)