Efeitos de diluidores contendo lipoproteínas de baixa densidade (LDL) e colesterol, e suas interações com o tempo de equilíbrio, na criopreservação do sêmen bovino

Resumo

O presente projeto pretende avaliar o efeito da associação das Ciclodextrinas Carregadas com Colesterol (CLC) e diluidores a base de Lipoproteínas de Baixa Densidade (LDL) purificadas da gema de ovo, e das possíveis interações entre estes agentes crioprotetores e o tempo de equilíbrio, no processo de criopreservação do sêmen bovino, sobre a motilidade espermática, integridade, peroxidação lipídica, função e composição lipídica das membranas espermáticas pós-descongelamento. Para isto, serão realizados dois experimentos. No experimento 1, serão realizadas coletas de sêmen de 15 touros. Cada ejaculado será dividido em quatro alíquotas, que serão diluídas com diluidores diferentes, utilizando a mesma concentração (30x106 sptz/mL): 1) Controle (Tris-gema-glicerol); 2) Colesterol (contendo apenas CLC); 3) LDL (contendo apenas LDL); 4) Colesterol + LDL (associação CLC + LDL). Cada alíquota diluída será envasada em palhetas de 0,5 mL e subdividida entre 3 máquinas de congelamento, que realizarão as mesmas das curvas de resfriamento e congelamento, porém realizarão diferentes tempos de equilíbrio a 5ºC: 0, 4 e 6 h. (totalizando 12 tratamentos). No experimento 2, serão realizadas coletas de 6 touros, e cada ejaculado será submetido aos mesmos tratamentos do experimento 1, porém utilizando a concentração de 60x106 sptz/mL. No experimento 1 serão realizadas a análise computadorizada da motilidade espermática (CASA), e as análises por citometria de fluxo da integridade das membranas plasmática e acrossomal, do estado de capacitação, do aumento da fosforilação do aminoácido tirosina e da peroxidação lipídica das membranas. No experimento 2 serão realizadas as análises de integridade e composição lipídica das membranas espermáticas pós-descongelamento, visando encontrar correlações entre estas variáveis. Os dados serão submetidos à análise de variância, empregando-se o programa SAS (1998). As médias serão comparadas pelo teste de SNK, ao nível de 5% de significância, e serão realizadas correlações simples de Pearson entre variáveis.