Impacto do diabetes tipo 2 e do tratamento com metformina na perda óssea induzida por ligadura, no reparo ósseo alveolar e na produção de citocinas ex vivo: estudo em ratos

Resumo

O objetivo do presente projeto será avaliar a influência do diabetes mellitus tipo 2 sobre a perda óssea alveolar induzida por ligadura, o reparo ósseo alveolar pós-exodontia e a produção ex vivo de citocinas em ratos normais ou diabéticos tratados ou não com metformina. Serão utilizados 112 ratos Wistar (n=14/grupo) distribuídos entre os grupos: Não Diabéticos sem periodontite (ND), Não Diabéticos com Periodontite (NDP), Não Diabéticos sem Periodontite Tratado (NDT), Não Diabéticos com Periodontite Tratado (NDPT), Diabéticos sem periodontite (D), Diabéticos Sem Periodontite Tratados (DT), Diabéticos com periodontite (DP), Diabéticos com Periodontite Tratados (DPT). O diabetes mellitus tipo 2 será induzido com administração de frutose e inoculação estreptozotocina. Os animais pertencentes aos grupos não diabéticos receberão somente água, enquanto os animais pertencentes aos grupos de diabetes receberão água com adição de frutose a partir do dia zero. No 14º dia do período experimental, os animais pertencentes aos grupos diabetes serão inoculados com estreptozotocina, enquanto os animais pertencentes aos grupos não diabéticos serão inoculados com tampão citrato (veículo). No 54º dia após o início do experimento e 40º dia após indução de diabetes, os grupos NDP, NDPT, DP, DPT receberão a ligadura, permanecendo com a mesma durante 30 dias. No 69º dia após o início do experimento, 55º dia após indução de diabetes e 15º dia após colocação da ligadura, os grupos NDT, NDPT, DT, DPT iniciarão o tratamento diário com metformina (40mg/Kg de peso corpóreo) por via oral até o fim do período experimental. Todos os animais serão submetidos a exodontia oito dias antes do final do período experimental, que ocorrerá no 84º dia. Após eutanásia, as mandíbulas e maxilas serão removidas, fixadas, descalcificadas e submetidas a processamento histológico, enquanto uma suspensão de células obtida do baço dos animais pertencentes aos diferentes grupos será estimulada in vitro por LPS de Escherichia coli para posterior coleta do sobrenadante e dosagem de mediadores imuno-inflamatórios: TNF-±, IFN-³, IL-12, IL-4, TGF-², IL-10, IL-6 e IL-17. Secções seriadas de mandíbula serão coradas para análise de: perda óssea alveolar, fosfatase ácida tartarato resistente (TRAP), células produtoras de osteoprotegerina (OPG), ligante do receptor ativador do NF-ºB (RANKL), osteopontina e osteocalcina. As maxilas removidas serão utilizadas para análise do reparo ósseo alveolar pós-extração em nível histométrico e da expressão gênica de Sox9, RunX2 e Osterix. Os resultados serão submetidos a teste de normalidade e serão selecionados teste paramétricos (ANOVA) ou não paramétricos (Kruskal Wallis). O nível de significância para todas as análises será estabelecido de 5% (p <0,05). (AU)