Efeitos de diferentes meios de cultivo, temperaturas e tempos de refrigeração sobre a viabilidade e expressão gênica de embriões bovinos produzidos in vitro

Resumo

O presente trabalho tem como objetivo verificar os efeitos de diferentes meios de cultivo, temperaturas e tempos de refrigeração sobre o desenvolvimento e qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro. Os seguintes experimentos serão realizados: exp.1, embriões cultivados em meio m-SOF nas temperaturas de 5°C (por 24 e 48 horas) e 25°C (24 horas; controle); exp. 2, embriões cultivados em meio BotuEmbryo® nas temperaturas de 5°C (por 24 e 48 horas), 25°C (24 horas) e o melhor resultado do exp. I.; exp. 3, embriões cultivados em meio Syngro® nas temperaturas de 5°C (por 24 e 48 horas), 25°C (24 horas) e o melhor resultado do exp. II. Os oócitos, obtidos a partir de ovários de vacas sacrificadas em frigorífico, serão selecionados em meio de maturação base MM-b. Grupos de 20 a 25 oócitos/gota serão maturados em MM-b acrescido de FSH e LH. A seleção espermática será realizada em gradiente descontínuo de Percoll, utilizando o meio TALP suplementado com PHE e heparina para Fertilização in Vitro (FIV). A Cultura dos Embriões in Vitro (CIV) será feita em meio SOF modificado; as etapas MIV, FIV e CIV serão efetuadas em incubadora de CO2 a 5%, em ar, a 38,7°C e alta umidade. Ao dia 7 pós-inseminação os blastocistos serão aleatoriamente transferidos para os grupos de tratamento. As taxas de expansão (24h) e de eclosão (48h), assim como o Número Total de Células (NTC) e a expressão dos genes SOD1, AOP-1, Hsp 70.1 e survivin serão avaliados após os respectivos períodos de refrigeração. ANOVA e teste T de Bonferroni serão empregados para análise de diferenças entre os grupos para o desenvolvimento embrionário, número total de células e proporção de células vivas e mortas. Os resultados de expressão gênica serão analisados através do teste de x2. Diferenças de P<0,05 serão consideradas como significativas. (AU)