Solubilização de membranas modelo de diferentes composições pelo detergente Triton X-100

Resumo

Detergentes são moléculas anfifílicas amplamente utilizadas como agentes solubilizadores de membranas biológicas. No entanto, membranas biológicas tratadas com detergentes apresentam fragmentos insolúveis ricos em esfingolipídios e colesterol. Devido a semelhanças de composição e característica, esses fragmentos têm sido associados aos lipid rafts e à fase líquido-ordenada. Aqui é proposto o estudo de aspectos físico-químicos que regem o processo de solubilização de modelos miméticos da membrana: vesículas lipídicas de composição controlada (misturas binárias e ternárias, principalmente dos lipídios POPC, SM e colesterol). Diferentes técnicas serão utilizadas para estudar o processo de solubilização de vesículas lipídicas pelo detergente TX-100, um dos detergentes mais empregados em protocolos de solubilização de membranas biológicas. Os aspectos termodinâmicos da interação detergente-lipídio serão investigados por calorimetria de titulação isotérmica; o tamanho das estruturas formadas durante a solubilização será obtido por turbidez, espalhamento de luz estático e/ou dinâmico; o processo de solubilização de vesículas gigantes será avaliado por microscopia óptica; a possível interferência do detergente na transição de fase dos lipídios será investigada por calorimetria diferencial de varredura e a capacidade dos detergentes de permeabilizar a membrana será investigada por cinética de vazamento de uma sonda fluorescente. O projeto investigará diferentes composições lipídicas a fim de obter informações sobre os fatores que influenciam a obtenção de fragmentos insolúveis de membrana. (AU)