O papel da (Na+,K+)-ATPase na capacidade osmorregulatória do caranguejo Ucides cordatus: uma abordagem bioquímica e molecular

Resumo

Este projeto de pós-doutorado é uma continuidade da linha de pesquisa que vem sendo desenvolvida pelo nosso grupo de pesquisa, com apoio da FAPESP, e que investiga a (Na+,K+)-ATPase branquial de crustáceos como marcador molecular da sua adaptação a biótopos de diferentes salinidades. As espécies dulcícolas enfrentam o desafio de desenvolver respostas fisiológicas às condições hiposmóticas. Estas adaptações relacionam-se ao transporte ativo de captura de íons e à diminuição da permeabilidade tegumentar. A capacidade osmorregulatória dos crustáceos depende do movimento transbranquial de íons Na+ e Cl- entre o meio externo e a hemolinfa, que é controlada pela (Na+,K+)-ATPase e pela V-ATPase, além de uma variedade de outros transportadores distribuídos nas membranas apicais e basolaterais das células branquiais. Ucides cordatus é naturalmente exposto a flutuações de salinidade, que varia de 2 a 33 0, como resultado do fluxo de marés a que está exposto nos manguezais. As alterações na salinidade (aumento ou diminuição) podem afetar a expressão e/ou a atividade de enzimas do sistema antioxidante e dos transportadores de membrana, bem como o consumo de oxigênio.O objetivo deste projeto consiste em compreender os mecanismos envolvidos nas adaptações bioquímicas, fisiológicas e moleculares durante o processo de invasão do ambiente de água doce por crustáceos bem como na excreção de amônia, empregando o caranguejo U. cordatus. Para caracterizar a capacidade osmorregulatória de U. cordatus, os animais serão aclimatados durante 10 dias nas seguintes salinidades: 20, 260 e 34 0. Para cada condição de aclimatação serão avaliadas: 1) as atividades da (Na+,K+)-ATPase, V-ATPase, Ca2+-ATPase e anidrase carbônica; 2) a modulação de cada atividade pelo seu(s) respectivo(s) modulador(es); 3) o efeito de inibidores específicos; 4) a excreção de amônio; 5) a formação da fosfoenzima; 6) o efeito do FXYD exógeno na atividade da (Na+,K+)-ATPase; 7) a concentração iônica e a osmolalidade da hemolinfa; 8) a expressão de RNAm das subunidades ± e B dos transportadores iônicos (Na+,K+)-ATPase e V-ATPase; 9) o consumo de oxigênio; 10) a atividade das enzimas de estresse oxidativo; 11) o efeito do K+ e NH4+ na modulação da atividade (Na+,K+)-ATPase e na formação da fosfoenzima; 12) a aclimatação dos caranguejos em diferentes concentrações de amônio; 13) a localização imunohistoquímica da (Na+,K+)-ATPase e V-ATPase.