Caracterização estrutural de agregados anfifílicos catiônicos: um estudo com a sonda fluorescente Laurdan

Resumo

O projeto a ser desenvolvido pelo aluno Marcos Kunihiro Masukawa é parte de um projeto mais abrangente do Grupo de Biofísica do IFUSP, que tem como objetivo a caracterização estrutural de agregados anfifílicos em solução aquosa (FAPESP 2013/14419-3). Em especial, o estudo com anfifílicos catiônicos é tema de pesquisa do pós-doutorando Dr. Julio H.K. Rozenfeld (FAPESP 2011/13079-9), em colaboração com o especialista de laboratório Dr. Evandro L. Duarte, e pesquisadores da área biológica, interessados no uso farmacológico de complexos lipídicos. Propomos aqui o estudo com vesículas do anfifílico DODAB (brometo de dioctadecildimetilamônio). O DODAB possui um amônio quaternário na cabeça polar, e, devido à carga positiva deste grupamento, nucleotídeos, oligonucleotídeos e DNA complexam-se com a bicamada. Desejamos caracterizar as vesículas puras e complexadas, e analisar, também, comparativamente, somente o efeito da blindagem eletrostática causada por estas moléculas na superfície das vesículas de DODAB, através da adição de sais ao meio. As principais técnicas a serem utilizadas serão a fluorescência do estado estacionário e a fluorescência resolvida no tempo, com a sonda Laurdan incorporada aos agregados de DODAB. Pretende-se entender melhor as estruturas das superfícies desses agregados anfifílicos catiônicos, por meio da comparação das características dessa sonda em agregados de lipídios neutros e aniônicos. Com isso, pretendemos contribuir para a melhor compreensão da estrutura de lipoplexes, usados em terapia gênica. Também temos como objetivo a melhor compreensão das propriedades da sonda Laurdan, estudando suas propriedades espectroscópicas em bicamadas catiônicas. Técnicas auxiliares deverão ser empregadas, e estudadas, para a caracterização dos agregados lipídicos: calorimetria diferencial de varredura (DSC), espalhamento de luz dinâmico (DLS) e medidas de potencial de superfície (potencial-z). Este projeto será desenvolvido em colaboração com o Dr. Evandro L. Duarte.