Estudos estruturais de hidrolases de glicosídeos em solução usando técnicas de espalhamento a baixo ângulo (SAS)

Resumo

As Hidrolases de Glicosídeos (GHs) exercem papeis fundamentais em vários processos biomédicos e aplicações industriais. A maioria destas enzimas possuem vários domínios funcionais ligados entre se por peptídeos conhecidos como linkers. Portanto, é muito importante determinar a organização estrutural de GHs em termos de posição e orientação de domínios individuais e compreender a interação entre estes domínios em condições próximos as fisiológicas. Estamos propondo usar técnicas de espalhamento a baixo ângulo (de raios-X e também de nêutrons) para estudar as GHs. Atualmente, as conformações, dinâmica e funções de GHs com múltiplos domínios não são compreendidas por completo. Por isso, informação sobre organização estrutural destas enzimas e sua mobilidade bem como as posições e orientações mútuas de domínios individuais bem como mudanças conformacionais introduzidas por ligantes ou mudanças de condições bioquímicas (pH e T) possam ser muito informativos. Portanto, o principal objetivo deste projeto é conduzir estudos de hidrolases de glicosídeos em solução, usando SAXS e SANS. Objetivamos compreender melhor a influência de conformação e flexibilidade de GHs em solução e interações entre seus domínios individuais, em contexto de atividade exercida contra substratos poliméricos. Um número grande de hidrolases de glicosídeos já foi clonado e expresso no grupo de Supervisor, Prof. Dr. Igor Polikarpov (grupo de Biotecnologia Molecular, IFSC/USP). Os experimentos de SAXS serão conduzidos em colaboração com Profs. Aldo Craievich (IF/USP) e Prof. Mario de Oliveira Neto (UNESP- Botucatu). Adicionalmente, quando julgado necessário, as enzimas serão estudadas usando SANS. O Candidato deste projeto já possui experiência com SAXS e SANS e conduziu experimentos em vários centros científicos internacionais. Acreditamos que isso será muito benéfico para execução do projeto proposto. (AU)