Avaliação da expressão de genes relacionados à virulência e resposta ao estresse oxidativo de biofilmes de Candida albicans submetidos à terapia fotodinâmica antimicrobiana mediada por Photoditazine® e curcumina

Resumo

O objetivo deste estudo será avaliar o efeito da Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) mediada pelos fotossensibilizadores (FSs) Photodithazine (PDZ) e Curcumina (CUR), sobre a expressão de genes responsáveis pela determinação de fatores de virulência de biofilmes de Candida albicans tais como, adesão e formação de biofilme (gene ALS1e HPW1) e sobre genes responsáveis pela reposta fúngica ao estresse oxidativo (genes CAP1, CAT1 e SOD1). Adicionalmente, e gene ACT 1 servirá como gene controle para realização do qPCR. Para isso, suspensões padronizadas de C. albicans ATCC 90028 serão preparadas, e submetidas a fase de adesão e formação de biofilme. Após formação dos biofilmes, os mesmos serão tratados com 100 e 200 mg/L de PDZ ou 40 e 80 µM de CUR por 20 minutos (tempo de pré-irradiação), e serão expostos as doses de luz LED de 37,5 e 50 J/cm2 para cada concentração de FS avaliada (660 nm e 450 nm). Suspensões adicionais serão tratadas somente com os FSs ou luz, e o controle será constituído de amostras que não receberão FS nem luz. Após os tratamentos propostos, as placas de 96 orifícios serão colocadas em cuba sonicadora para o desprendimento dos biofilmes. Após os tratamentos, as amostras serão submetidas a extração e purificação de RNA, conversão em cDNA e realização de qPCR para avaliação da expressão gênica, que será realizado no equipamento CFX96 (BioRad): passo 1 (1X) 95ºC/ 3 min; passo 2 (35X) 95ºC/ 15 seg, 58ºC/ 30 seg, 68ºC/ 15 seg, onde ocorrerão a coleta de dados e as análises em tempo real; passo 3 (1X) 95ºC/ 1 min; passo 4 (1X) 55ºC/ 1 min; passo 5 (80X) 55ºC/ 1 min, para análise da melting curve. Os dados obtidos serão avaliados pelo teste estatístico mais apropriado. (AU)