Ensaio de complementação trofectodérmica para células pluripotentes: uma proposta para avaliação da pluripotência na espécie bovina

Resumo

Após o surgimento da reprogramação celular induzida, realizada através da adição de fatores de transcrição "Yamanaka" (Oct4, Sox2, Klf4 e cMyc) às células somáticas, a quantidade de pesquisas relacionadas à geração e manutenção da pluripotência aumentou muito. Ainda, investigações adicionais sobre o estado pluripotente dessas células ainda são necessárias, uma vez que diferentes protocolos, caracterizações e propósitos têm sido utilizados. Uma grande incerteza sobre as iPS é quão preservado é o estado pluripotente destas células. Dos muitos instrumentos utilizados para investigar o estado pluripotente das células tronco (embrionárias ou induzidas), o quimerismo embrionário é destacado. Dentro deste contexto, a partir do ensaio de complementação tetraplóide (TCA) é possível gerar um indivíduo totalmente novo cujo genótipo é maioritariamente/exclusivamente derivado das células pluripotentes utilizadas no embrião quimérico, pelo menos em murinos. No entanto, em bovinos, o TCA não tem a mesma eficiência, por isso desenvolvemos uma nova estratégia para atingir esse objetivo. Essa nova estratégia foi chamada de ensaio de complementação de trofectodérmica (TrCA) e tem um processo de patente pendente. Assim, iPSCs bovinas (biPSCs) são usadas para produzir quimeras embrionárias in vitro com diferentes metodologias (TCA e TrCA) pela agregação de biPSC com embriões (diplóides ou tetraplóides) ou com fragmentos de trofectoderma de embriões produzidos in vitro. A fim de verificar a competência embrionária, avaliaremos o blastocisto quimérico na expressão de genes relacionados à qualidade do embrião, na organização de organelas e núcleo por análise ultraestrutural (descritiva) e também a imunolocalização para diferenciação de tecidos embrionários. Nossa pesquisa pode potencialmente fornecer conhecimento sobre o status da manutenção de biPSC pluripotentes e também sobre a capacidade de gerar novos indivíduos por meio da TrCA em bovinos. (AU)