Análise da expressão gênica de microrganismos em biofilmes microcosmos cariogênicos

Resumo

A ocorrência de cárie é dependente da dieta do hospedeiro que causa alterações ecológicas e estruturais no biofilme dental. Esse biofilme é formado por diversos microrganismos que se organizam como comunidades de células imersas em substâncias poliméricas extracelulares produzidas por eles mesmos, a matriz extracelular. Entre os microrganismos, Streptococcus mutans está associado ao desenvolvimento de cárie principalmente por seu aporte na construção da matriz extracelular via a metabolização de sacarose em exopolissacarídeos e por ser acidogênico e acidúrico. Os modelos de biofilmes in vitro não reproduzem completamente o ambiente natural e não permitem controlar todos os parâmetros que podem influenciar o seu desenvolvimento. Entre os modelos propostos, o microcosmo mimetiza melhor o que ocorre na cavidade bucal. Em um projeto de doutorado em andamento (FAPESP 2017/26623-5) foi desenvolvido o "modelo de biofilme de microcosmo de três refeições". Neste modelo, foram realizadas duas estratégias para inoculação de microrganismos da saliva: uma única inoculação e múltiplas inoculações, onde os biofilmes foram formados sobre esmalte e submetidos a desafio nutricional de "fartura e miséria" semelhante à ingestão de carboidratos na dieta. A análise longitudinal dos biofilmes mostrou competição entre espécies microbianas e alteração da matriz extracelular nesses modelos. Ainda, os dois modelos levam à desmineralização do esmalte. Portanto, o objetivo deste projeto é analisar a expressão gênica de microrganismos em biofilmes microcosmos cariogênicos via RNA-seq (transcriptoma) para esclarecer o papel de S. mutans frente às outras espécies. A validação será via RT-qPCR. Os testes estatísticos serão aplicados de acordo com a distribuição para interpretar os resultados, com um nível de significância de 5%.