Lipidações e seus efeitos nas Proteínas de Estruturação e Compactação do Golgi (GRASPs)

Resumo

As Golgi Reassembly And Stacking Proteins (GRASPs) estão envolvidas em uma série de funções, tanto em mecanismos de secreção não convencional, quanto de estruturação e organização do aparato de Golgi. Entretanto, o entendimento do seu exato papel em cada situação ainda necessita de mais resultados estruturais e funcionais em nível molecular. No desempenho de tais funções, GRASPs parecem sempre estar, de alguma forma, interagindo com membranas. A presença de modificações pós-traducionais, como a miristoilação e a palmitoilação, é parte fundamental ao se pensar em uma estratégia de obtenção de informações detalhadas acerca dos processos de interação entre GRASPs e membranas. Ressalte-se que tais modificações pós-traducionais têm sido rotineiramente pouco investigadas nos estudos reportados até hoje, o que compromete os modelos previamente propostos para interações GRASP-membranas. Assim, temos a possibilidade de contribuir para geração de conhecimento em dois problemas: (1) reconstituição e caracterização das GRASPs em suas versões miristoiladas e palmitoiladas, com potencial de produção de dados para entendimento do papel das GRASPs na estruturação do Golgi e em vesículas de secreção; (2) avaliação da sinergia entre a presença da membrana e a formação de estruturas supramoleculares de GRASPs (por exemplo, fibras do tipo amilóide). Para isso, utilizaremos protocolo de miristoilação de GRASPs recentemente estabelecido em nosso grupo. Nos valeremos da combinação de uma série de técnicas de Biofísica e Biologia Molecular, que vão desde a caracterização estrutural por Ressonância Magnética Nuclear (RMN), até o estudo das GRASPs lipidadas e sua interação com ligantes naturais, como as golginas GM130 e Golgina45, e com modelos de membrana biológica através de espectroscopias como a Ressonância Magnética Eletrônica (RME). Os dados preencherão uma grande e muito pouco explorada lacuna, qual seja, a adequada avaliação da presença de membranas sobre a díade estrutura-função de GRASPs. (AU)