Avaliação funcionalidade molecular de MICA e MICB em indivíduos saudáveis

Resumo

As moléculas MICA e MICB são expressas constitutivamente em fibroblastos, monócitos e células epiteliais, no entanto, sua expressão é estimulada em condições como o câncer, infecções e doenças autoimunes, agindo como marcador de estresse celular. Os genes MICA e MICB estão codificados no cromossomo 6 na região do Complexo Principal de Histocompatibilidade (MHC), a região mais variável do genoma humano. Variantes desses genes parecem estar associadas a um perfil diferencial de expressão das moléculas na superfície das células e à liberação de moléculas solúveis, modulando o sistema imunológico ao interagir com o receptor NKG2D, presente em células natural killer e subpopulações de linfócitos T. Esse projeto visa avaliar a funcionalidade molecular de MICA e MICB em indivíduos saudáveis, identificando marcadores genéticos que modificam o perfil transcricional dos genes, seus padrões de edição e produção de moléculas solúveis, em células mononucleares em situações fisiológicas e após estímulo. Para isso, selecionaremos amostras com um perfil genético característico após sequenciamento por Sanger (e.g., portadoras de variantes não sinônimas), com posterior cultura de células mononucleares. Em seguida, quantificaremos a expressão de MICA e MICB em diferentes níveis (mRNA, proteína de membrana e forma solúvel) antes e após estímulo com peróxido de hidrogênio ou LPS. Os dados de expressão serão correlacionados com o perfil genético das amostras. Demonstrar a heterogeneidade de expressão dessas moléculas na superfície celular e/ou liberadas de maneira solúvel no sobrenadante pode servir de base para compreender a dinâmica entre as moléculas MICA e MICB em diversas situações patológicas ou transplantes, além de auxiliar em estudos de associações com doenças. (AU)