Desenvolvimento de plataformas para obtenção e caracterização de anticorpos recombinantes não glicosilados contra o ponto de controle imunológico TIM-3 e avaliação do papel desses anticorpos na reativação de linfócitos T em tumores

Resumo

Apesar dos significativos avanços na pesquisa, o câncer ainda representa uma ameaça à saúde global. A cronicidade desta doença e constante estímulo antigênico leva à diferenciação de células TCD8+ em populações com funções efetoras alteradas, perfil epigenético único e níveis elevados de expressão de múltiplos receptores inibitórios. Estes receptores de regulação negativos possuem a função de servir de freios para o sistema imunológico mantendo a auto tolerância e prevenindo danos aos tecidos, sendo expressos nas células imunes sob condições fisiológicas normais. Entretanto, essas moléculas também participam de mecanismos de escape ao sistema imune no desenvolvimento de tumores. Terapias dirigidas ao bloqueio dessas moléculas mostram-se atrativas no tratamento de diversos tipos tumorais. Neste contexto, a imunoterapia emergiu utilizando anticorpos monoclonais para bloquear receptores como TIM-3, restaurando assim a capacidade das células T exauridas para eliminar tumores e vírus. No entanto, até o momento, apesar dos esforços, a resposta imunológica de muitos pacientes a imunoterapia atinge no máximo 40%. O desenvolvimento de anticorpos recombinantes cuja síntese e produção é versátil e diversificada, representa a possibilidade de se obter novas e diferenciadas moléculas que atuem na reversão da condição de exaustão das células T e que possam aumentar significativamente a eficiência da imunoterapia, a expressão em sistema microbiano propõe ainda uma alternativa rápida e de menor custo na produção desses anticorpos específicos. Neste contexto, o projeto tem como principal objetivo buscar novos bloqueadores contra o receptor de controle imunológico TIM-3, a partir de seleção por phage display, utilizando uma biblioteca de anticorpos humana sintética e sua posterior expressão procariótica em linhagem de E. coli SHuffle, geneticamente adaptada para expressão citoplasmática de anticorpos monoclonais não-glicosilados. Tais anticorpos, após caracterizados quanto sua sensibilidade e especificidade, serão avaliados quanto sua capacidade de reativação de linfócitos T usando novos modelos de tumores in vitro, com o cultivo 3D e esferoides, além dos modelos animais. A presente proposta, portanto, consiste na inovação no desenvolvimento de uma plataforma para obtenção de anticorpos recombinantes não-glicosilados, produzidos em bactérias contra esse receptor, abrindo novas possibilidades terapêuticas contra problemas atuais e futuros, visto que, uma vez padronizada, essas plataformas poderá se estender a outros receptores ou alvos possibilitando significativo avanço na obtenção de imunoterapeuticos. (AU)