Avaliação do efeito cardiovascular da 6-nitrodopamina em átrio isolado e coração perfundido de rato

Resumo

As catecolaminas (CAs) fazem parte de um grupo de compostos que possuem o grupo catecol (3,4-diidroxibenzeno) conectado a um grupo amina por uma ponte etil. Elas participam nos mecanismos integrativos, neurais e endócrinos englobando o sistema simpático-adrenal. São sintetizadas através do aminoácido tirosina, o qual pode ser derivado da dieta ou ser produzido pelo fígado, além de que as CAs podem ser originadas de fonte endotelial. Esses compostos atuam sobre receptores alfa e beta-adrenérgicos, com diferentes respostas para cada receptor e tecido, podendo, por exemplo, modular o tônus vascular. A 6-nitrodopamina (6-ND) tem se apresentado com efeitos prolongados e diferenciados em comparação à outras catecolaminas, provocando o aumento da frequência cardíaca de átrio isolado por um período maior antes de retornar ao nível basal. Objetivos: Investigar o papel fisiológico da nova catecolamina 6-nitrodopamina, incluido: a liberação dela no átrio e ventrículo de rato; o efeito cronotrópico da 6-ND, de antagonistas alfa-adrenérgicos, beta-adrenérgicos e compostos tricíclicos em átrio isolado; o efeito inotrópico desses fármacos no coração isolado e os efeitos deles na frequência cardíaca e pressão arterial in vitro. Assim como, isolar o receptor dessa catecolamina utilizando cromatografia de afinidade.Metodologia: Todos os protocolos experimentais foram submetidos à aprovação pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da UNICAMP (CEUA/UNICAMP) sob nº 5942-1/2022, nº 5557-1/2020 e nº 5831-1/2021. Ratos Wistar machos adultos (280 a 320 g) serão distribuídos aleatoriamente entre dois grupos: Tratado com L-NAME e Controle. O primeiro grupo receberá o tratamento crônico com o inibidor do óxido nítrico sintase (L-NAME) na água de consumo por 4 semanas (20 mg / rato / dia) e o segundo receberá água da torneira. Os animais serão anestesiados com isoflurano e a eutanásia será realizada por exsanguinação, anteriormente, para a análise do coração isolado, será administrado anestésico com heparina para prevenir a coagulação do sangue nas coronárias. Serão realizadas três análises principais com os animais: 1) a extração em fase sólida e quantificação por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em tandem (LCMS-8060, Shimadzu) da 6-nitrodopamina; 2) avaliação dos efeitos de concentração resposta com diferentes compostos, incluido a 6-ND, sobre o átrio isolado dos animais em um sistema de aquisição de dados PowerLab 400 que registra a força de tensão do tecido; e 3) análise do inotropismo no coração dos animais com perfusão de Langendorff, em que será registrado a pressão do ventrículo esquerdo utilizando um transdutor de pressão e será calculado as taxas máximas de contração e relaxamento. Além disso, será avaliado o isolamento do receptor da 6-nitrodopamina através da técnica de cromatografia de afinidade com uma coluna de agarose e a 6-ND triciada. (AU)