Papel da osteoprotegerina na modulação in vitro de monócitos por células de papila apical

Resumo

Reabsorção de tecidos mineralizados é um evento biológico presente em patologias orais desafiadoras como doença periodontal, periodontite apical e reabsorção radicular externa. O papel de células mesenquimais na modulação do metabolismo ósseo já é conhecido, mas não o papel de células da papila apical neste contexto especialmente por meio do efeito de osteprotegerina (OPG). O objetivo deste estudo é investigar o papel da OPG produzida por SCAP na modulação da apoptose e diferenciação de monócitos por meio sua ligação com TRAIL e/ou RANKL, sob condição inflamatória. SCAP serão pré-ativadas com lipopolissacarídeo de Escherichia coli, e então plaqueadas. As células serão submetidas à análise da expressão gênica de OPG, TRAIL e RANKL por RT-qPCR e o sobrenadante será coletado para a detecção dos fatores OPG, TRAIL, IL-33 e RANKL por ELISA. Com base nestes achados, serão preparados meios condicionados com anticorpo neutralizante para OPG. Monócitos de sangue periférico serão isolados e colocados em cultura. Eles serão tratados com os meios condicionados de SCAP-anti-OPG ou SCAP, ambos coletados das células pré-ativadas ou controle, e serão investigados quanto à viabilidade celular e apoptose na presença ou não de anticorposneutralizadores de TRAIL e IL-33. A seguir, os monócitos serão induzidos à diferenciação em osteoclastos com adição de M-CSF e RANKL na presença dos meios condicionados por 21 dias. A avaliação da diferenciação em osteoclastos será feita por meio da análise de anéis de actina, detecção de fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) e catepsina K. A co-cultura deSCAP e monócitos será estabelecida para avaliar a capacidade de SCAP em modular a osteoclastogênese por meio de RANKL presente na membrana celular. Os dados serão analisados estatisticamente. (AU)