Isolamento, identificação e validação de novos alvos tubulares renais das gliflozinas

Resumo

As gliflozinas, além de se mostrarem eficazes no tratamento do diabetes mellitus tipo 2 (DM2), vêm demostrando melhoras significativas em quadros de insuficiência cardíaca (IC) e doença renal crônica DRC. No entanto, os benefícios clínicos reportados não podem ser explicados apenas pela inibição do SGLT2 em túbulo proximal renal. Neste projeto,pretende-se isolar e identificar alvos tubulares renais das gliflozinas para além do SGLT2. Para tal, utilizaremos síntese química combinada à cromatografia de imunoafinidade e espectrometria de massa. Inicialmente desenvolveremos sondas químicas constituídas pela molécula de empagliflozina ligada à sequência peptídica FLAG (DYKDDDDK), intercalada por espaçadores (linkers), como por exemplo: 3XFlag (DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK), hexaglicina ou pentadecaglicina. Esses espaçadores serão avaliados quanto àsolubilidade, distância e interações não específicas. Em seguida, a sonda empagliflozinalinker-FLAG será incubada com extrato de proteínas de membrana de rim de rato e passadas através de coluna contendo anti-FLAG. O eluato será então submetido à espectrometria demassa para identificação de potenciais alvos. Os dados obtidos por meio deste projeto poderão fornecer maior compreensão dos mecanismos de ação dos benefícios renais das gliflozinas no DM2, IC e DRC.