Application of CRISPR Interference (CRISPRi) for Gene Silencing in Pathogenic Species of Leptospira

Autor(es)

Fernandes, L. G., V ; Hornsby, R. L. ; Nascimento, A. L. T. O. ; Nally, J. E.

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: JOVE-JOURNAL OF VISUALIZED EXPERIMENTS; v. N/A, n. 174, p. 14-pg., 2021-08-01.

Resumo

Leptospirosis is a global neglected zoonosis, responsible for at least 1 million cases per year and almost 60 thousand deaths. The disease is caused by pathogenic and virulent bacteria of the genus Leptospira, either by direct contact with the bacteria or indirectly by exposure to contaminated water or soil. Domestic and wild animals act as reservoir hosts of infection, shedding leptospires from colonized renal tubules of the kidney, via urine, into the environment. The generation of mutant strains of Leptospira is critical to evaluate and understand pathogenic mechanisms of infection. CRISPR interference (CRISPRi) has proven to be a straightforward, affordable, and specific tool for gene silencing in pathogenic Leptospira. Therefore, the methodological details of obtaining the plasmid constructs containing both dCas9 and guide RNA, delivery of plasmids to Leptospira by conjugation with the E. coli strain beta 2163, and transconjugant recovery and evaluation, will be described. In addition, the recently described Hornsby-Alt-Nally (HAN) media allows for the relatively rapid isolation and selection of mutant colonies on agar plates. (AU)

• Processo FAPESP: 17/06731-8 - Aplicação de CRISPR-interferência na elucidação da patogênese da leptospirose e desenvolvimento de novas estratégias para obtenção de mutantes knockout
• Beneficiário: Luis Guilherme Virgílio Fernandes
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Processo FAPESP: 14/50981-0 - Busca de proteínas de superfície nas sequências do genoma da Leptospira interrogans: caracterização funcional e imunológica para o entendimento de mecanismos envolvidos na patogênese de bactéria
• Beneficiário: Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Temático
• Processo FAPESP: 19/20302-8 - Silenciamento de RNA não-codificador (ncRNA) mediado por interferência CRISPR (CRISPRi) em cepas saprofíticas e patogênicas de Leptospira
• Beneficiário: Luis Guilherme Virgílio Fernandes
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado