Avaliação simultânea das membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial de espermatozoides de carneiros por sondas fluorescentes

Autor(es)

Celeghini, E. C. C. ^[1] ; Nascimento, J. ^[1] ; Raphael, C. F. ^[1] ; Andrade, A. F. C. ^[1] ; Arruda, R. P. ^[1]

Afiliação do(s) autor(es)

^[1] USP, VRA, FMVZ, Lab Biotecnol Semen & Androl, BR-13635900 Pirassununga, SP - Brazil

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia; v. 62, n. 3, p. 536-543, JUN 2010.
• Citações Web of Science: 17

Resumo

Neste experimento, foi definida uma combinação de sondas fluorescentes: iodeto de propídio (PI), aglutinina de Pisum sativum conjugada ao isotiocionato de fluoresceína (FITC-PSA) e JC-1. Para esta proposta, quatro ejaculados de três carneiros (n=12), que apresentavam motilidade >80% e alterações morfológicas <10%, foram diluídos em meio TALP e divididos em duas alíquotas. Uma alíquota foi submetida a três ciclos de flash frozen e descongelação, para induzir danos nas membranas celulares e distúrbios na função mitocondrial. Três tratamentos foram preparados com as seguintes proporções preestabelecidas de sêmen fresco: sêmen submetido a flash frozen: 0:100 (T0), 50:50 (T50) e 100:0 (T100). As amostras foram coradas no protocolo proposto e avaliadas por microscopia de epifluorescência. Para integridade de membrana plasmática, detectada pela sonda PI, foi obtida a equação: v=1,09+0,86X (R²=0,98). O acrossomo intacto, verificado pela sonda FITC-PSA, produziu a equação: v=2,76+0,92X (R²=0,98). O alto potencial de membrana mitocondrial, marcada em vermelho-alaranjado pelo JC-1, foi estimado pela equação: v=1,90+0,90X (R²=0,98). As equações lineares resultantes demonstraram que a técnica é eficiente e prática para avaliação simultânea das membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial em espermatozoides de carneiros. (AU)

• Processo FAPESP: 01/13940-4 - Efeitos da somatotropina bovina recombinante sobre concentrações hormonais plasmáticas, características espermáticas e IGF-1 e IGFBP3 no plasma seminal em animais submetidos à degeneração testicular
• Beneficiário: Rubens Paes de Arruda
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Processo FAPESP: 00/14653-6 - Avaliação dos efeitos da criopreservação do sêmen bovino quanto à motilidade, viabilidade espermática, integridade acrossômica e função mitocondrial determinadas por citometria de fluxo
• Beneficiário: Eneiva Carla Carvalho Celeghini
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado