Caracterização molecular de genes envolvidos no processo de patogenicidade/virulência no fungo patogênico humano Paracoccidioides brasiliensis

Resumo

O fungo dimórfico P. brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM). A PCM é uma micose sistêmica granulomatosa prevalente na América Latina, com áreas endêmicas no Brasil, Colômbia e Venezuela. Recentemente o nosso grupo estabeleceu uma base de dados de 13490 ESTs da fase leveduriforme patogênica de P. brasiliensis. Os ESTS foram posteriormente clusterizados em 1397 contigs e 3295 singlets, totalizando 4692 genes putativos de P. brasiliensis. Este trabalho criou uma plataforma inicial para estudos aprofundados ao nível de "microarrays., função de genes mitocondriais e da resposta do modelo animal à infecção por P. brasiliensis. Além disso, a construção de um pipeline para a análise automática dos ESTs possibilitou a disponibilização do "know-how para o grupo, visando o sequenciamento de RSTs para uma compreensão inicial da organização genômica de P. brasiliensis. Este projeto permitirá um entendimento global não somente do agente patogênico P. brasiliensis, mas também da interação fungo-hospedeiro. Os objetivos principais deste projeto são a caracterização molecular de genes envolvidos no processo de patogenicidade/virulência do fungo patogênico humano Paracoccidioides brasiliensis. Assim como usar a genômica para ampliar o conhecimento sobre a biologia deste organismo. Os objetivos específicos são: 1) a confecção de microarrays, carregando seqüências representativas de aproximadamente 5000 genes de P. brasiliensis para o estudo da expressão gênica deste microorganismo em diferentes condições; 2) a confecção de microarrays carregando sondas complementares a 16 mil genes de camundongo, visando o estudo da expressão gênica diferencial de vários tecidos do hospedeiro saudável X infectado; 3) identificação de cDNAs predominantemente expressos na fase patogênica leveduriforme de P. brasiliensis através de "Suppression Subtraction Hybridízation- SSH; 4) quantificação através de "Real-time RTPCR da expressão dos genes selecionados nos itens 1 a 3; 5) seqüenciamento e anotação do genoma mitocondrial de P. brasiliensis; 6) estudo da variabilidade do genoma mitocondrial em diferentes isolados de P. brasiliensis; 7) obter 10.000 segmentos de seqüências genômicas aleátorias de P. brasiliensis para amostrar a organização gênica deste organismo e ampliar a descoberta de genes neste organismo; 8) estudar aspectos funcionais de genes associados à função mitocondrial em P. brasiliensis e 9) utilizar genes de P. brasiliensis que codificam fatores de adesão (como p.ex., a gp43) ou novos fatores de virulência como indutores de proteção imunológica, através de vacinas de DNA. (AU)