Estudos funcionais e estruturais de três proteínas humanas reguladoras: Fez1, Ki-1/57 e NSAP1 (hnRNP-Q)

Resumo

Pretendemos estudar a função e estrutura de três proteínas humanas reguladoras envolvidas em doenças. Da proteína NSAP1 (=hnRNP-Q) sabe-se já que ela é uma proteína ligadora ao RNA e possivelmente envolvida no processo de splicing ou na degradação de mRNAs que codificam onco-proteínas. Estruturalmente á proteína não foi estudada mas sabe-se que ela é composta de um domínio ácido, 3 domínios RRM (que ligam RNA) e um domínio RG-box, que é alvo de metilação em argininas. As funções e as estruturas das outras duas proteínas Ki-1/57 e Fez1 ainda não são conhecidas. Através de estudos feitos anteriormente no nosso grupo identificamos várias proteínas envolvidas em processos de sinalização e da regulação da transcrição que interagem com Fez1 ou Ki-1/57. Isso pode sugerir que as duas proteínas são envolvidas neste contexto celular, embora a associação á outras funções ainda é possível. Neste projeto pretendemos estudar a estrutura dessas proteínas ou de seu domínios através de métodos espectroscópicos e de cristalografia. Ainda estudaremos suas funções usando várias técnicas modernas de biologia molecular, incluindo entre outras: silenciamento gênico - (método de iRNA), identificação de modificações pós-traducionais (espectrometria de massa), identificação de proteínas que interagem in vitro (sistem duplo híbrido em levedura) e in vivo (espectrometria de massa), SELEX (Systematic Evolution of Ligands by eXponential Enrichment). (AU)