Isolamento e caracterização de células progenitoras adultas provenientes do ligamento periodontal de humanos

Resumo

A doença periodontal é definida como uma doença infecciosa caracterizada pela destruição do tecido periodontal de suporte (cemento dental, ligamento periodontal, osso e tecido gengival). Os objetivos da terapia periodontal incluem a eliminação e o controle da infecção, seguido pela posterior correção anatômica dos defeitos produzidos pela doença. Embora diferentes modalidades terapêuticas têm sido utilizadas clinicamente, visando à regeneração dos tecidos periodontais de suporte perdidos, até o presente momento, os resultados obtidos são limitados e pouco previsíveis. Desta forma, há uma necessidade eminente de se desenvolver novos paradigmas fundamentados no entendimento dos mecanismos celulares e moleculares que regulam o desenvolvimento e a regeneração dos tecidos periodontais. A presença de inúmeros tipos celulares como parte do ligamento periodontal gera especulações da presença de células progenitoras neste tecido com a função de manter sua homeostasia e regenerar os tecidos periodontais danificados. De fato, estudos recentes têm mostrado a capacidade de células do ligamento periodontal em diferenciar-se em cementoblastos e osteoblastos. Diante do exposto, e da possibilidade de se empregar populações de células progenitoras (tronco) obtidas a partir do ligamento periodontal no tratamento de lesões periodontais, o presente estudo terá como objetivos: 1) isolar populações de células progenitoras de origem mesenquimal do ligamento periodontal de dentes permanentes e decíduos de humanos, 2) caracterizar fenotipicamente estas populações celulares e 3) avaliar comparativamente os dois grupos de células progenitoras (dentes permanentes e decíduos) em relação: a) a capacidade proliferativa, b) ao padrão de modulação celular frente a fatores envolvidos na formação e regeneração dos tecidos periodontais (in vitro) e c) a capacidade regenerativa destas células (in vivo). Após a obtenção da cultura primária de células do ligamento periodontal de dentes permanentes e decíduos, células CD105+ CD34- CD45- (fenótipo característico de células progenitoras de origem mesenquimal) serão obtidas por meio da técnica de separação magnética. Utilizando-se o PCR quantitativo (PCRq), estas serão avaliadas em relação à expressão de marcadores de superfície de células progenitoras e ao potencial de diferenciação em linhagens osteogênicas e adipogênicas (por meio da expressão de marcadores específicos para osteoblastos/cementoblastos e adipócitos), além da formação de nódulos minerais. A seguir, as células progenitoras serão tratadas com BMP-2 e FGF-8, e avaliada quanto expressão de genes envolvidos na formação dos tecidos dentários (PCRq). In vivo, as células obtidas a partir de dentes decíduos e permanentes serão transplantadas em bolsas subcutâneas no dorso de camundongos imunossuprimidos e em defeitos periodontais criados em ratos imunodeficientes, para avaliar a formação de tecidos mineralizados ectopicamente e o seu potencial em relação à regeneração dos tecidos periodontais de sustentação, respectivamente, por meio de análises histomorfométricas.