Análises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de Disgenesia Gonadal XY

Resumo

A expressão do gene SRY (Sex Determining Region in chromosome Y) constitui o primeiro passo para a diferenciação sexual masculina nos embriões de mamíferos. Este gene localizado no braço curto do cromossomo Y codifica uma proteína de 204 aminoácidos dos quais 79 constituem um domínio denominado HMG-box que confere à esta proteína a capacidade de interagir com o DNA. Este domínio é comum entre proteínas com função reguladora de expressão. A expressão normal do gene SRY durante a vida intra-uterina induz as gônadas indiferenciadas a transformarem-se em testículos a partir da diferenciação das células de Sertoli primordiais em células adultas. Desta maneira, mutações no gene SRY em indivíduos 46,XY causam disgenesia gonadal. Entretanto, em alguns casos deste distúrbio não foram encontradas mutações na região codificante do gene. Com o intuito de esclarecer os mecanismos moleculares responsáveis por estes casos, estudos da região 5’ não traduzida do gene SRY revelaram sítios de ligação a fatores de transcrição altamente conservados no genoma de diferentes espécies. Entre os sítios consenso detectados, dois deles interagem com o fator ubiquitinante Sp1 e foram então chamados Sp1A e Sp1B intercalados por um sítio WT1. Em um estudo recente foi detectada uma mutação no sítio Sp1A de um indivíduo com disgenesia gonadal pura. Outros membros da família apresentavam ambigüidade genital e seu pai, também portador da mutação, possuia grave hipospadia ao nascimento. Para tentar esclarecer os efeitos desta mutação nos mecanismos moleculares de regulação da expressão do gene SRY, este trabalho visa analisar a interação da proteína Sp1 com os sítios localizados na região promotora de SRY e o efeito da mutação nesta interação. Complementando, será analisado o efeito da mutação na expressão através de ensaio de expressão com gene-repórter. Além disso, será analisado o efeito de uma nova mutação (localizada na ORF do gene SRY) na ligação da proteína SRY com o DNA, e ainda serão investigadas mutações em novos casos.