Estudo da efetividade da terapia fotodinâmica antimicrobiana na inativação de espécies de Candida e do dano celular causado nas células fúngicas: avaliação in vitro e in vivo de dois fotossensibilizadores

Resumo

Este projeto de pesquisa contará com a realização de três estudos, nos quais serão avaliados os fotossensibilizadores (FS) Photodithazine (PDZ) e Curcumina, associados à luz do tipo LED. No Estudo I, serão selecionados 10 isolados clínicos das espécies C. albicans, C. glabrata e C. tropicalis. Alíquotas das suspensões celulares das três espécies serão transferidas para placas de 96 orifícios, tratadas com três concentrações dos FSs (10; 25 e 50 mg/L) e expostas a três doses de luz (18; 25,5 e 37,5 J/cm2). Suspensões adicionais serão tratadas somente com os FSs ou apenas iluminadas. Serão obtidas diluições seriadas de cada amostra (10-1 a 10-3), e alíquotas de 25 µL dessas diluições serão plaqueadas em SDA. Após a incubação (37ºC; 48 horas), será realizada a contagem das colônias viáveis (ufc/mL), e os valores obtidos serão analisados com o teste estatístico mais adequado. No Estudo II serão utilizadas cepas de referência de C. albicans, C. glabrata e C. tropicalis. Suspensões celulares de cada espécie serão submetidas à Terapia Fotodinâmica (PDT) por meio da variação do tipo de FS (PDZ e Curcumina), concentração do FS (10, 25 e 50 mg/L) e dose de luz (37,5; 25,5 e 18,0 J/cm2). Em seguida, as suspensões serão submetidas à contagem das colônias viáveis, análise quantitativa MTT, quantificação da liberação de proteínas totais, liberação de desidrogenase láctica, liberação da fosfatase alcalina e avaliação biomolecular de danos ao núcleo da célula. Os resultados obtidos para as suspensões controle e experimental em cada análise serão comparados pelo método estatístico apropriado. No Estudo III, camundongos portadores de candidose induzida no dorso da língua serão submetidos à PDT, mediada pelos FSs PDZ e Curcumina. Após três dias da inoculação, os animais serão submetidos à PDT, tratados somente com FS, tratados somente com luz ou não receberão nenhum tratamento (n=5 cada grupo). Em seguida, será realizada recuperação de C. albicans da língua dos animais por meio da coleta com swabs, semeadura em SDA, incubação, e contagem de colônias viáveis. Os camundongos serão sacrificados para remoção da língua e posterior análise histológica. Os resultados serão analisados método estatístico apropriado. (AU)