Avaliação da efetividade da terapia fotodinâmica antimicrobiana na inativação de espécies de Candida e do dano celular causado a células epiteliais: avaliação in vitro e in vivo da cloro alumínio ftalocianina e e outros derivados

Resumo

Este projeto de pesquisa contará com a realização de três estudos, nos quais serão avaliados a cloro alumínio Ftalocianina e outros derivados associados à luz LED. No estudo I, duas cepas padrões de C. albicans e C. glabrata serão estudadas em suspensão planquitônica e organizadas em biofilmes. Alíquotas das suspensões celulares serão transferidas para placas de 96 orifícios, tratadas com três concentrações da Ftalocianina (10; 25 e 50 mg/L) e expostas a três doses de luz (18; 25,5 e 37,5 J/cm2). Os biofilmes serão formados sobre a superfície de membranas de filtragem, onde alíquotas das suspensões dos microrganismos serão inoculadas. Após 48 horas, o conjunto será transferido para placas acrílicas de 24 orifícios para iniciar a PDT. Serão obtidas diluições seriadas de cada amostra (10-1 a 10-3), e 25 ¼L dessas diluições serão plaqueadas em SDA. No Estudo II, duas cepas padrões C. albicans e C. glabrata serão incubadas juntamente com cultura de queratinócitos. As co-culturas serão tratadas nas mesmas condições anteriores. Após a PDT, os queratinócitos e as células fúngicas serão avaliadas quanto ao metabolismo celular pelo método de MTT, morfologia celular pela microscopia eletrônica de varredura, tipo de morte celular e níveis intracelulares de espécies reativas de oxigênio pela citometria de fluxo. No Estudo III, camundongos portadores de candidose induzida na língua serão submetidos à PDT. Após três dias da inoculação, os animais serão submetidos à PDT, tratados somente com o FS, tratados somente com luz ou não receberão nenhum tratamento (n=5 cada grupo). Em seguida, a C. albicans da língua dos animais será recuperada através da coleta com swabs, semeadura em SDA, incubação, e contagem de colônias viáveis. Além disso, será realizada análise macroscópica por fotografias e microscópica por histologia, e avaliação de expressão gênica de citocinas anti e pró-inflamatórias pela técnica de PCR-RT. (AU)