Efeito das enterotoxinas estafilocócicas (ses) sobre a produção e a função de granulócitos maduros na medula óssea de camundongos

Resumo

As SEs são proteínas produzidas e excretadas pela bactéria gram-positiva Staphylococcus aureus, e são as principais responsáveis pela maioria das condições patológicas associadas às infecções por esta bactéria, incluindo as infecções pulmonares observadas em ambientes hospitalares. Estudos clínicos recentes têm relatado uma forte correlação entre a presença de anticorpos do tipo IgE para SEs e a amplificação de doenças inflamatórias pulmonares alérgicas em humanos. No entanto, os mecanismos responsáveis pela exacerbação do quadro alérgico em humanos atópicos, após exposição com estas toxinas ainda são pouco investigados e conhecidos. Resultados preliminares recentes, em nosso grupo de pesquisa, têm demonstrado que a exposição das vias áreas de camundongos e ratos com SEA ou SEB, provoca um acréscimo no número das formas imaturas e maduras de granulócitos (eosinófilos e neutrófilos) na medula óssea, sugerindo ser este um dos locais de ação destas toxinas para promover exacerbação do quadro alérgico em humanos atópicos (BACHERT et al., 2007; ROSSI & MONASTEROLO, 2004) e em modelos animais (MARIANO et al., 2009). Entretanto, até o momento, poucos trabalhos científicos têm explorado as ações destas SEs sobre a produção e/ou função de granulócitos da medula óssea. Assim, o objetivo principal deste projeto é investigar se SEA ou a SEB possuem efeitos diretos ou indiretos sobre a produção e/ou função de células da medula óssea de camundongos. Assim, os ensaios experimentais propostos neste projeto, visam investigar os seguintes parâmetros: 1) Curvas dose- e tempo-efeito das alterações nas contagens de granulócitos (maduros e imaturos) na medula óssea de camundongos expostos as SEs; 2) No sobrenadante e na suspensão celular da medula óssea de camundongos expostos às SEs, avaliaremos possíveis alterações nos níveis de citocinas (GM-CSF, IL-5, IL-4, IL-3 e TNF-a), quimiocinas (eotaxina, SDF-1±/CXCL12, G-CSF, MIP2/CXCL2 e KC/CXCL1), taquicininas de fibras sensoriais (substância P e Neurocinina A e a expressão protéica de seus respectivos receptores: NK1 e NK2) e de nitrato e nitrito (e expressão protéica das isoformas da óxido nítrico sintase: eNOS, bNOS e iNOS); 3) Em granulócitos maduros (neutrófilos e eosinófilos) da medula óssea de animais expostos as SEs investigaremos a capacidade de adesão e quimiotaxia in vitro, destas células, bem como a expressão de moléculas de adesão envolvidas na mobilização de granulócitos para o tecido inflamado; 4) Todos os parâmetros mencionados acima também serão investigados em sobrenadante e suspensão celular da medula óssea de animais naïve, incubadas in vitro com as SEs. Considerando-se os altos índices de infecções hospitalares provocadas por Staphylococcus aureus, e as recentes evidências clínicas de que o prévio contato com SEs representa um fator etiológico para o desenvolvimento de doenças respiratórias alérgicas, os dados obtidos neste projeto poderão representar um grande avanço no esclarecimento do mecanismos de ação destas toxinas, e fornecer subsídios para o desenvolvimento de alternativas terapêuticas eficazes no tratamento de doenças respiratórias precedidas por infecção pulmonar causada por bactérias gram-positivas. (AU)