Apoptose e participação dos macrófagos no estabelecimento da via eruptiva durante a erupção de molares de ratos

Resumo

A erupção dentária é um processo complexo que envolve, de maneira coordenada, a destruição e remodelação de diferentes estruturas, tais como o tecido ósseo e a lâmina própria. Dessa maneira, para que a via eruptiva seja estabelecida, as células da lâmina própria e os componentes da matriz extracelular, pelo menos em parte, devem ser degradados. Portanto, a morte celular deve ser um evento essencial durante a degradação da lâmina própria. O propósito deste estudo é verificar se a apoptose constitui parte integrante do processo de degradação da lâmina própria situada entre o epitélio oral e a porção oclusal de molares de ratos, em diferentes fases de erupção. Além disso, pretende-se investigar quais células (macrófagos e/ou fibroblastos) são responsáveis pela fagocitose das células em apoptose e dos componentes da matriz extracelular. Ratos com 09, 11, 13 e 16 dias serão sacrificados e fragmentos das maxilas contendo o 1º molar serão removidos e, imediatamente, fixados em formaldeído. Após a descalcificação, os fragmentos contendo os molares serão processados e incluídos em parafina e, os cortes corados com H&E (hematoxilina & eosina) para análise morfológica e caracterização da fase eruptiva. Cortes histológicos serão submetidas ao método do TUNEL (Terminal-transferase dUTP Nick End Labelling), usado para identificar células em apoptose, e a densidade numérica de células em apoptose na lâmina própria será estimado. Alguns cortes contendo o 1º molar superior em erupção serão também submetidos a imuno-histoquímica para marcação de macrófagos (anti-ED1), a fim de verificar a possível participação destas células na fagocitose de corpos apoptóticos na lâmina própria nas diferentes fases da erupção. Para caracterizar o processo de morte das células da lâmina própria, bem como identificar quais células participam da fagocitose das células mortas e dos componentes da matriz extracelular durante a involução do tecido conjuntivo da via eruptiva, fragmentos de maxila contendo a lâmina própria da via eruptiva serão fixados em formaldeído/glutaraldeído para análise ultraestrutural.