Cancro cítrico: Análise da interação planta-patógeno revelada pelo transcriptoma do patógeno e do hospedeiro

Resumo

O cancro cítrico, causada pela bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), é uma das principais doenças que acometem a citricultura mundial. A busca por plantas cítricas comerciais resistentes ao cancro cítrico tem sido um dos principais objetivos dos programas de melhoramento de citros devido aos grandes prejuízos causados pela doença. No entanto, esta estratégia não tem produzido resultado até o momento, devido principalmente à poliembrionia e longo período juvenil do gênero Citrus, o que dificulta a seleção de genótipos por hibridação convencional. A identificação dos genes de Xac envolvidos na patogenicidade e virulência e a identificação dos sistemas de defesa ativados na planta em resposta ao patógeno é importante tanto para a compreensão do patossistema como para o desenvolvimento de estratégias que venham a controlar o cancro cítrico. Desta forma, o presente projeto tem como objetivo investigar, através da tecnologia de RNA-Seq (Whole Transcriptome Shotgun Sequencing), a expressão temporal de genes de Xac e de variedades de laranja doce (Citrus sinensis) resistentes e suscetíveis ao cancro cítrico. Suspensões do isolado 306 de Xac serão inoculadas em folhas de laranja doce da variedade resistente Shamouti e da variedade suscetível Hamlin e estas serão coletadas às 6, 12, 24, 48 e 72 horas após a inoculação da bactéria. O RNA total das folhas inoculadas será extraído pelo método do Trizol e a separação dos mRNAs da planta e da bactéria será feita por cromatografia em colunas de oligo (dT) celulose. Os genes expressos serão sequenciados pela técnica de nova geração RNA-Seq utilizando a plataforma HiScanSQ System (Illumina). Após o sequenciamento, a ferramenta BLAST será utilizada para identificar os genes de Xac e de citros expressos em cada tempo. Para sequências de Xac a comparação será com o genoma de Xac isolado 306 e para sequências de citros, a comparação será com o GenBank e com o genoma de Citrus sinensis já disponível.