Estudo da regulação dos fatores de transcrição SF-1 e LRH-1 em células adrenais normais e tumorais

Resumo

Os receptores nucleares LRH-1 e SF-1 estão envolvidos com a regulação da esteroidogênese nas gônadas e adrenais e com a proliferação em diferentes tipos celulares. Os mecanismos de atuação desses fatores de transcrição e o papel de seus reguladores Dax-1, SHP, USF e Pod-1 no efeito proliferativo de células normais e tumorais não estão bem estabelecidos. Sendo assim, analisaremos o papel de SF-1 e LRH-1 na proliferação de células normais e no controle do processo tumoral da suprarrenal humana. Para testar a hipótese que SF-1 e LH-1 são importantes na proliferação da suprarrenal, utilizaremos culturas primárias de células da adrenal de rato e linhagens de células tumorais NCI-H295 e Y-1, além de culturas de células de tumores adrenais humanos (adenomas e carcinomas) obtidos no nosso laboratório e que são provenientes de fragmentos de tumores de pacientes. Esses diferentes tipos celulares serão transfectados com plasmídeos contendo a seqüência de Pod-1 para testarmos a importância do controle desse fator de transcrição sobre a expressão de SF-1 e LRH-1. A análise da expressão gênica e protéica dos fatores de transcrição e seus reguladores serão feitas através de PCR quantitativo e "imunoblotting" nas linhagens e culturas de células que estarão ou não transfectadas com Pod-1. O efeito biológico da ação de Pod-1 nos diferentes tipos celulares será analisado através da análise da proliferação e apoptose bem como a expressão de alguns tipos de proteínas relacionadas com o ciclo celular. Além disso, analisaremos a interação de Pod-1 no promotor de Sf-1 e Lrh-1 nos tipos celulares já citados através de ensaios de imunoprecipitação de cromatina (ChIP assay). O melhor entendimento do mecanismo molecular e bioquímico envolvido no processo normal e na progressão da doença se faz importante considerando-se a baixa sobrevida dos pacientes com carcinoma adrenal e a alta incidência de tumores adrenais pediátricos no Brasil. (AU)