Efeito do tempo de tratamento e da dose de fluoreto administrada cronicamente na expressão protéica em fígado de ratos

Resumo

Em trabalho prévio realizado pelo nosso grupo foi observado que o fluoreto pode provocar alterações na expressão de várias proteínas hepáticas. Em adição, há relatos na literatura sugerindo que as alterações causadas pelo fluoreto no organismo são dose e tempo-dependentes. Assim, o objetivo deste trabalho é analisar alterações em fígado de ratos submetidos à intoxicação crônica por fluoreto em diferentes tempos e doses, utilizando análises proteômicas e histológicas como ferramentas. Serão utilizados para isso 36 ratos Wistar machos com 21 dias, que serão divididos em 2 grupos (n=18 animais por grupo), de acordo com o tempo de tratamento (20 dias, grupo A, ou 60 dias, grupo B). Cada grupo será dividido em 3 subgrupos (n=6 animais por subgrupo), de acordo com a dose de fluoreto a ser administrada através da água de beber, a saber: 0 mg/L (controle- subgrupos A1 e B1), 15 mg/L (subgrupos A2 e B2) ou 50 mg/L (subgrupos A3 e B3). Todos os grupos receberão, durante o tratamento, ração AIN-93, contendo baixo teor de fluoreto. Decorridos os períodos experimentais, os animais serão anestesiados em 0,5 mL/Kg de peso de Anasedan + 1,5 mL/Kg de cloridadto de quetamina vetaset, e o fígado e o sangue serão coletados. Será feita análise de fluoreto no plasma e tecido hepático com o eletrodo íon específico, após difusão facilitada por hexametildisiloxano. Também será feita a fixação de parte do fígado para a confecção das lâminas para análise histológica. Após a extração das proteínas hepáticas, as mesmas serão submetidas à eletroforese bidimensional. Os géis dos grupos controle e tratados serão escaneados utilizando-se o ImageScanner e analisados com o software ImageMaster Platinum. Os spots de interesse serão então excisados e analisados por espectrometria de massa para identificação das proteínas diferencialmente expressas. Após verificação da normalidade e homocedasticidade dos dados, os mesmos serão submetidos à análise estatística apropriada (p<0,05). (AU)