Extração de fragmentos de anticorpos monoclonais scFv por sistemas micelares de duas fases aquosas

Resumo

Importante porcentagem (70-80%) nos custos de obtenção de produtos biotecnológicos corresponde às etapas de separação e purificação sendo, portanto, necessária otimização das metodologias a serem empregadas de forma a assegurarem boa relação custo-benefício do produto de interesse. Os sistemas micelares de duas fases aquosas apresentam-se como uma tecnologia de biosseparação apropriada, visto que proporcionam meios adequados para a integridade das macromoléculas e permitem regular as condições experimentais com possibilidade de extração seletiva. Atualmente, muitos processos imuno-inflamatórios têm sido associados às doenças atero-coronarianas, apontando para envolvimento benéfico de anticorpos e seus fragmentos dirigidos contra lipoproteínas de baixa densidade (LDL) oxidadas. Com isto surge a necessidade de estudos de novos métodos de obtenção utilizando microrganismos como modelo de expressão de proteínas, com destaque para Pichia pastoris, uma levedura de fácil manipulação, com capacidade de realização de modificações pós-translacionais, crescimento rápido e bons rendimentos. Diante disto, este projeto tem a finalidade de estudar a purificação de fragmentos de anticorpos monoclonais SCFv anti-LDL oxidada produzidos por cultivo de P. pastoris geneticamente modificada por extração líquido-líquido em sistemas micelares de duas fases aquosas formados por Triton X-114/ Tampão McIlvaine. Estudar-se-á o efeito dos componentes químicos dos sistemas sobre a integridade da macromolécula e também serão analisados os efeitos de diferentes variáveis como pH, temperatura, concentração de surfactante, concentração de sais e a presença de moléculas ligantes sobre a partição e a recuperação do anticorpo scFv. Serão selecionadas as melhores condições experimentais e se aplicará um aumento de escala de até 1000 vezes em relação ao seu volume inicial para testar seu potencial de aplicação na indústria. (AU)