Caracterização da estrutura oligossacarídica de prolactina glicosilada humana (G-hPRL), nativa hipofisária e recombinante obtida em células CHO tratadas ou não com cicloheximida

Resumo

A prolactina humana (hPRL) é um hormônio polipeptídico secretado pela hipófise anterior sob regulação do hipotálamo, envolvido em uma variedade de processos biológicos como o desenvolvimento da glândula mamária e lactação. O produto recombinante é importante no diagnóstico médico e no tratamento de insuficiência da lactação. Este hormônio pode ocorrer sob a forma não glicosilada (NG-hPRL) e glicosilada (G-hPRL), com pesos moleculares de aproximadamente 23 e 25 kDa, respectivamente; possui um único sítio de N-glicosilação (ASP 31), que é parcialmente ocupado, representando assim um modelo particularmente interessante de glicosilação. A atividade biológica da G-hPRL é muito menor comparada à não glicosilada (~4 vezes) e sua função fisiológica ainda não é bem definida: a porção de carboidrato parece ter um importante papel na biossíntese, secreção, atividade biológica, e sobrevivência plasmática do hormônio. Na presença de cicloheximida (CHX) já obtivemos em células CHO um aumento de ~4 vezes em valores absolutos na expressão da G-hPRL, além da diminuição da produção da isoforma não glicosilada. No entanto um estudo da composição oligossacarídica da G-hPRL recombinante em comparação com a natural, sintetizada pela hipófise, ainda não foi realizado assim como não foi estudada a influência da CHX nas mesmas estruturas de carboidratos. Este estudo será realizado no presente Projeto, a partir de células CHO adaptadas ao cultivo em suspensão, o que facilita a ampliação da escala, aumenta a densidade celular e conseqüentemente a produtividade do hormônio. Avaliaremos também a atividade biológica in vitro da G-hPRL utilizando células BaF3/LLP, estudando também a sua farmacocinética. (AU)