Avaliação da expressão gênica e protéica em processos inflamatórios e neoplasias do trato digestório: estômago e colorretal

Resumo

Estudos recentes têm revelado que inflamações crônicas predispõem para diferentes tipos de cânceres, com o envolvimento de componentes importantes do processo inflamatório na carcinogênese. No trato digestório, ambos órgãos estômago e cólon estão expostos a diversos fatores endógenos e exógenos associados ao estilo de vida que podem desencadear o processo inflamatório, como a infecção pela bactéria H. pylori que aumenta o risco para o câncer gástrico. A erradicação da H. pylori é considerada um tratamento de primeira linha para reverter às lesões pré-neoplásicas e prevenir a progressão maligna, mas uma parcela dos pacientes não tem resposta efetiva. Poucos estudos têm avaliado a ocorrência de alterações genéticas antes e após a erradicação da bactéria, que possam auxiliar no esclarecimento de mudanças importantes relacionadas à resposta dos pacientes a terapia em associação com os genótipos de virulência da bactéria. O câncer colorretal (CCR) também se enquadra como modelo de carcinogênese relacionada com processo inflamatório, como a colite ulcerativa e a infecção pela bactéria Fusobacterium nucleatum. Frequentemente seu desenvolvimento segue a sequência adenoma-carcinoma, pois, na maioria dos casos, o CCR origina-se como pólipo adenomatoso. Diante do exposto, o presente projeto tem por objetivos avaliar a expressão do RNAm de genes que atuam na resposta inflamatória do hospedeiro como TLR2, TLR4, IL-8, TGF-², PAP, PAI-1, PLAT e IFITM1 em pacientes com dispepsia gástrica antes e após a terapia de erradicação da H. pylori, pela técnica de qPCR em tempo real; investigar a expressão protéica dos respectivos genes, por método imuno-histoquímico; bem como investigar os genótipos de virulência cagA da H. pylori e associação com a resposta a erradicação da bactéria, como também com o padrão de expressão gênica e protéica. Também será avaliada a cinética celular, como o índice de proliferação celular e o índice apoptótico. Recentemente finalizamos uma pesquisa sobre a expressão gênica e protéica da Anexina-1 e Galectina-1, com ação anti-inflamatória em gastrite crônica e câncer gástrico que evidenciaram expressão elevada do RNAm e da proteína anexina-1 em gastrite e no câncer gástrico, mas a galectina-1 apresentou expressão elevada apenas no câncer gástrico. Portanto sendo interessante também investigar em outras lesões precursoras que fazem parte da cascata de progressão do câncer de estômago. Portanto, pretendemos avaliar a expressão quantitativa do RNAm dos genes ANXA1 (anexina-1) e LGALS1 (galectina-1) e expressão protéica em amostras de metaplasia intestinal, úlcera gástrica e mucosa gástrica normal, pela técnica de qPCR em tempo real e imuno-histoquímica, respectivamente, assim como associar com a infecção pela H. pylori e os genótipos de virulência cagA e vacA. Da mesma forma em carcinoma colorretal e sua lesão precursora adenoma, também serão analisados os níveis de expressão gênica e protéica da anexina-1 e galectina-1 e índice de proliferação pelo antígeno Ki-67 e associação com a abundância da bactéria Fusobacterium nucleatum. Ainda em CCR pretendemos avaliar os níveis de expressão gênica dos receptores de patógenos TLR2 e TLR4 que apresentam polimorfismos funcionais como TLR2 -196 a -174 del e TLR4 -1607 T/C visando avaliar sua possível influência conforme os portadores dos genótipos selvagens ou polimórficos nos níveis de expressão desses genes e suscetibilidade ao câncer colorretal esporádico. Os resultados poderão evidenciar mudanças na expressão de genes importantes associados com o processo inflamatório, que possam auxiliar na em estratégias futuras de terapias mais efetivas dessas lesões e prevenção da progressão maligna. (AU)