Análise de expressão de genes relacionados a via de MELK em astrocitomas

Resumo

Com o intuito de descobrir novos alvos terapêuticos o nosso grupo de pesquisa selecionou genes hiperexpressos em glioblastomas (GBMs) em relação ao astrocitoma pilocítico (AGI) pela análise de microarray de oligonucleotídeos. Entre os genes selecionados, o da proteína quinase denominada MELK (Maternal Embryonic Leucine Zipper Kinase) mostrou uma maior expressão em GBMs em relação ao AGI, confirmado posteriormente por PCR em tempo real (qRT-PCR) em uma série ampliada de astrocitomas. Posteriormente, em estudos funcionais in vitro, observou-se uma redução na proliferação e de formação de colônias em crescimento independente de ancoragem após o silenciamento da expressão de MELK por siRNA. Foi observado também que MELK pode estar inibindo a apoptose, bem como estar envolvido no aumento da migração celular (Resultados Preliminares). Uma maior limitação em estudos do papel de MELK como uma proteína quinase é a falta de conhecimento dos processos celulares ou vias de sinalização nos quais estão envolvidos. Pela grande potencialidade de MELK como alvo terapêutico, a continuidade deste estudo é fundamental para o melhor entendimento da função de MELK no envolvimento da tumorigênese dos astrocitomas. Este projeto, portanto, tem como objetivo analisar o perfil de expressão de um painel de genes relevantes para os processos celulares da via relacionadas a MELK no processo da tumorigênese (proliferação, migração, apoptose) através da realização do estudo de expressão gênica de três RT2 Profiler PCR Arrays (Cancer Pathway Finder, Cell Motility e Apoptosis) antes e após silenciamento da expressão de MELK por siRNA em linhagem estabelecida de GBM. O estudo de expressão de proteínas será realizada através de eletroforese bidimensional por espectrometria de massa. A validação da expressão dos genes relevantes será realizada por qRT-PCR em uma casuística de astrocitomas de diferentes graus de malignidade. Os resultados esperados são entender melhor o papel de MELK e de proteínas envolvidas em processos e vias de sinalização em astrocitomas, que poderiam levar à descoberta de novos alvos terapêuticos. (AU)