Toxicologia do fluoreto: estudos proteômicos em intestino e fígado

Resumo

O trato gastrointestinal é a principal rota de exposição ao fluoreto (F), sendo este íon rapidamente absorvido a partir dele. A complexa coordenação da função intestinal é realizada por redes neuronais autonômicas interligadas e incorporadas às suas paredes, sendo este conjunto denominado Sistema Nervoso Entérico (SNE). Embora os efeitos neurotóxicos do F sobre o SNC sejam bastante descritos, não existem estudos relacionados com a neurotoxicidade do F sobre o SNE. Em trabalho prévio realizado pelo nosso grupo foi observado que o F pode provocar alterações na expressão de várias proteínas hepáticas. Em adição, há relatos na literatura sugerindo que as alterações causadas por este íon no organismo são dose e tempo-dependentes. O presente projeto será desenvolvido na forma de dois subprojetos cujos objetivos são: (1) avaliar o efeito da exposição a dose aguda ou crônica de F sobre a população geral de neurônios entéricos e também sobre as subpopulações que expressam os seus principais neurotransmissores, a saber: Óxido Nítrico (NO), Peptídeo Vasoativo Intestinal (VIP), Acetilcolina (ACh), Peptídeo Relacionado ao Gene da Calcitonina (CGRP) e Substância P (SP), bem como estabelecer o perfil proteômico diferencial no intestino dos diferentes grupos de tratamento; (2) analisar alterações em fígado de ratos submetidos à intoxicação crônica por F em diferentes tempos e doses, utilizando análises proteômicas e histológicas como ferramentas. No subprojeto 1, os animais serão divididos em 5 grupos, que receberão as doses crônicas de 0, 5 ou 50 mgF/L(por 30 dias), enquanto a dose aguda será de 0 ou 100 mgF/Kg (gavagem gástrica). Ao final de cada tratamento, os ratos serão eutanasiados para a realização dos experimentos imunohistoquímicos do plexo mioentérico do intestino delgado, especialmente de 3 segmentos (duodeno, jejuno e íleo). Posteriormente, será realizada a análise proteômica como um meio de melhor explorar e integrar os fenômenos encontrados sobre os segmentos e populações neuronais mais afetadas pelo F. No subprojeto 2, os animais serão divididos em 2 grupos, de acordo com o tempo de tratamento (20 dias, grupo A, ou 60 dias, grupo B). Cada grupo será dividido em 3 subgrupos, de acordo com a dose de F a ser administrada através da água de beber, a saber: 0 (controle- subgrupos A1 e B1), 15 (subgrupos A2 e B2) ou 50 mg/L (subgrupos A3 e B3). Ao final do tratamento os animais serão eutanasiados e os fígados submetidos a análises de F, histológica e proteômica. (AU)