Avaliação da osteogênese e dos perfis transcricionais (RNAm e microRNAs) de células osteoblásticas da calvária e da medula óssea de ratas submetidas à condição de osteoporose

Resumo

Atualmente, as células mesenquimais de diversas origens são consideradas fontes para substituição de tecidos. Estas células têm potencial osteogênico e podem ser elegíveis para o reparo e manutenção do tecido ósseo, sendo muito atrativas para a engenharia tecidual. Entretanto, mudanças no seu comportamento podem ser causadas por fatores como a osteoporose, afetando a sua habilidade de auto-renovação e diferenciação. Sendo assim, o objetivo do presente projeto é comparar a expressão gênica de células mesenquimais provenientes da medula óssea diferenciadas em células osteoblásticas com o de células osteoblásticas provenientes da calvária de ratas submetidas à condição de osteoporose. Serão utilizadas 18 ratas Wistar divididas em grupos controle e tratado (indução da osteoporose). As ratas do grupo tratado serão submetidas à ovariectomia bilateral através de protocolo adequado e após 150 dias da cirurgia, as ratas de ambos os grupos serão sacrificadas para coleta dos fêmures e de fragmentos da calvária. Os experimentos serão realizados em triplicata e a partir dos materiais coletados, serão isoladas as células mesenquimais da medula óssea e as células osteoblásticas da calvária e colocadas em garrafas com meio de cultura suplementado (osteogênico) para proliferação e posterior plaqueamento em placas de 24 poços (n=5) para avaliação dos seguintes parâmetros: proliferação e viabilidade celular, quantidade de proteína total e atividade de fosfatase alcalina (ALP), detecção e quantificação de nódulos mineralizados e análise da expressão de proteínas associadas à osteogênese por meio de imunofluorescência e PCR em tempo real. Além disso, será realizada a avaliação do perfil transcricional (RNAm e microRNAs) e construção de redes gênicas. Os dados dos ensaios bioquímicos serão analisados com o auxílio de programas de estatística para pd0.05 assim como programas de bioinformática especializados serão utilizados para avaliar os dados do perfil transcricional. (AU)