Efeito de géis contendo clorexidina ou polifenóis na composição proteica e na resistência ácida da película adquirida

Resumo

O objetivo deste trabalho será detectar alterações no perfil proteico em películas adquiridas formadas sobre esmalte e dentina in vitro, mediante aplicação de géis contendo clorexidina ou EGCG, bem como se a modificação da película por estes tratamentos é capaz de alterar o seu potencial protetor contra a desmineralização. Para o experimento serão utilizados 135 blocos de esmalte e 135 de dentina bovina (3X3 mm), sendo que 90 blocos de cada substrato serão incubados em saliva humana para formação de película adquirida e 45 blocos permanecerão sem a formação da película adquirida. Os blocos com película serão divididos em 3 grupos por substrato (n=30 por grupo), que diferirão em relação ao gel que será aplicado sobre os mesmos: gel placebo, gel de EGCG e gel de Clorexidina. Destes 30 blocos por grupo, metade será utilizada para o desafio erosivo e análise de cálcio na solução e o restante para análise proteômica da película. Os 45 blocos por substrato sem a película serão divididos entre os mesmos 3 grupos e submetidos ao desafio erosivo e análise de cálcio em solução. A película adquirida será formada sobre os blocos mediante exposição a pool de saliva humana estimulada, de 3 voluntários sadios. Após a incubação dos blocos em saliva será realizada a aplicação dos géis nos blocos, com e sem a película adquirida. Será aplicada uma fina camada por 1 min, seguido por remoção cuidadosa. Os blocos com formação da película novamente serão incubados em saliva humana. A película será coletada com papel filtro embebido em ácido cítrico 3% e processada para análise por nLC-MS/MS. Noventa blocos de cada substrato, sendo 45 com formação de película (n=15 por grupo) adquirida e 45 sem película adquirida (n=15 por grupo) serão submetidos a desafio erosivo e posterior quantificação de cálcio liberado na solução de ácido cítrico. Após o desafio erosivo dos blocos com formação de película será coletada a película adquirida para nova análise proteômica, a fim de se identificarem as proteínas ácido-resistentes. A Análise proteômica da película será feita por nLC-MS/MS. Os espectros MS/MS obtidos serão confrontados com bases de dados proteínas humanas (SWISS-PROT e TrEMBL), usando o algoritmo MASCOT. Os dados proteômicos referentes à quantificação proteica serão analisados utilizando o software PLGS. Para a análise dos dados de liberação de cálcio, será utilizado o software GraphPad InStat. Inicialmente os dados serão checados em relação à normalidade (teste de Kolmogorov-Smirnov) e homogeneidade (teste de Bartlett), para seleção do teste estatístico apropriado. O nível de significância será fixado em 5%.