Comparação molecular entre células-tronco mesenquimais de membrana amniótica canina e felina

Resumo

Estudos têm revelado que a membrana amniótica humana, felina e canina representa uma boa fonte de células tronco mesenquimais (CTM). Sua obtenção não causa conflitos éticos, pois o âmnio é comumente descartado após o nascimento do indivíduo. Devido à característica inovadora da utilização de células tronco na medicina regenerativa, diversos testes estão sendo realizados a fim de sanar dúvidas sobre possíveis complicações de seu emprego, tais como: infecções no ato da aplicação, deterioração da função tecidual e principalmente sobre o potencial carcinogênico das linhagens celulares. Testes teratogênicos mostraram-se negativos nas espécies felina e humana, viabilizando a utilização deste tipo de célula nestas espécies, porém, o mesmo teste foi realizado em cães com resultado positivo para teratoma condenando a sua utilização. A proposta deste estudo é traçar um perfil molecular e teste teratogênico minucioso comparativo entre a membrana amniótica canina e felina uma vez que os experimentos foram favoráveis nesta espécie, com vistas a descobrir em que ponto elas se diferem que possa justificar os resultados obtidos em estudos anteriores com âmnio canino. Para a análise das células será utilizada membrana amniótica obtida de neonatos nascidos por cesareana ou castrações eletivas de cadelas prenhes na faixa etária de 30 a 45 dias do Hospital Veterinário FZEA(UDHC) e campanhas de castração em Pirassununga. O âmnio será separado manualmente das outras membranas fetais e acondicionado em placas de Petri. Ele será lavado em solução de PBS-L, macerado manualmente, submetido à digestão enzimática e posteriormente cultivado em meio de cultura para células mesenquimais. Após o estabelecimento da cultura serão realizados análises de R-PCR, imunocitoquímica e citometria de fluxo para a identificação dos marcadores mesenquimais CD90, CD105 e CD73, marcadores hematopoiéticos CD45 e CD34, marcadores tumorais Vimentina, Nestina, p-53, c-Myc e CD30 além do teste carcinogênico em camundongos imunossuprimidos. (AU)