Eficácia do silenciamento da enzima NOX3 NADPH oxidase na preservação das células ciliadas após implante coclear

Resumo

A perda auditiva neurossensorial (PANS) representa um dos maiores problemas de saúde pública, na população mundial. O implante coclear está indicado, para as perdas auditivas profundas bilaterais, sendo o método mais bem sucedido da atualidade, porém está associado à lesão irreversível do epitélio sensorial auditivo, com inúmeros esforços, a fim de identificar métodos de preservação das células ciliadas, ampliando, assim, suas indicações. No implante coclear, o estresse oxidativo é uma das etiologias envolvidas, na lesão da célula ciliada, por apoptose. Desta forma, a manipulação na produção de radicais livres, interferindo na via de apoptose, constitui estratégia terapêutica, que pode ser testada, com o intuito de promover otoproteção. A NOX3 oxidase é uma enzima da família da NADPH oxidase, geradora do radical livre superóxido, no órgão de Corti. Objetivos: Este estudo tem por objetivo primário avaliar se introdução do shRNA Nox3 via cocleostomia reduzirá a expressão da enzima NOX3 induzida pela introdução do eletrodo no implante coclear e como objetivo secundário avaliar o grau de apoptose nestas células bem como sua morfologia e a concentração de BAX. Metodologia: Serão utilizadas 105 cobaias (cavia porcellus) (210 cócleas) de ambos os sexos com peso entre 250 e 350g divididas em três grupos, após exame otoscópico normal e teste de potencial evocado auditivo > 40dB. No grupo de estudo (GE) 150 cócleas receberão o shRNA de silenciamento da NOX3 NADPH oxidase, via cocleostomia, oito dias antes da colocação do implante coclear, sendo utilizados 5 clones diferentes para o mesmo gene. Grupo Placebo, 30 cócleas submetidas à inserção do shRNA scramble (vazio), via cocleostomia, o Grupo implante (GI), 30 cócleas submetidas ao implante coclear apenas sem injeção prévia. Em todos os grupos de 30 cócleas, (proporção) 20 serão utilizadas para o ensaio de PCR em tempo real (RT-PCR) e 10, para o ensaio de detecção de apoptose, cujo método será o de microscopia de fluorescência, utilizando o anticorpo da classe IgG2b de ratos M30 Cytodeath. A análise estatística será por meio de suas médias e desvios-padrão, e analisadas quantitativamente utilizando-se teste t de Student e a análise de variância (ANOVA) para amostras emparelhadas. Será adotado nível de significância estatística de 5% (p < 0,05). (AU)