Identificação de microRNAs diferencialmente expressos em carcinomas serosos de alto grau de pacientes com distintas evoluções clínicas

Resumo

Introdução: o câncer de ovário epitelial representa a quinta causa de morte por câncer entre as mulheres. Apesar de muitos estudos apontarem a importância dos miRNAs no desenvolvimento do câncer de ovário, pouco se sabe da expressão diferenciada destas moléculas em pacientes com bom ou ruim prognóstico. Objetivos: caracterizar o perfil da expressão de miRNAs em amostras de carcinomas seroso de ovário em pacientes com evoluções clínicas distintas. Métodos: serão selecionadas, retrospectivamente, quarenta amostras de carcinoma seroso de ovário de alto grau provenientes do banco de tumores do A C Camargo Câncer Center oriundas de cirurgia com ressecção ótima cujas pacientes tinham estadiamento III e passaram por acompanhamento clínico mínimo de 2 anos. Destas, 20 amostras serão provenientes de pacientes que responderam bem a quimioterapia (carboplatina e plactaxel) e outras 20 amostras serão provenientes de pacientes que apresentaram recidiva ou óbito pela doença. Dez amostras de bordas normais serão microdissecadas para a construção de um pool a ser usado como controle não-tumoral global. A identificação dos miRNAs diferencialmente expressos nas diferentes amostras será realizada por qRT-PCR através do sistema de cartões TaqMan human microRNA array 2.0 A+B. Serão, ainda, realizados a validação dos miRNAs selecionados em tecido a fresco, a busca in silico de possíveis alvos gênicos destes miRNAs por meio de algoritmos como o miRWalk, miRanda, PicTar, miRBase e TargetScan e testes de atividade biológica dos miRNAs eleitos em cultura celular de ovário, bem como a avaliação da expressão gênica dos alvos destes miRNAs por qRT-PCR e proteica por imunocitoquímica. (AU)