Desenvolvimento e validação da técnica espectrometria de massas por monitoramento de reação múltiplo (MRM) para mensurarão dos níveis de citocinas em plasma bovino

Resumo

A inflamação é um processo biológico que usualmente é a principal causa ou consequência de várias doenças e síndromes. Estes processos inflamatórios estimulam a produção e o envolvimento de várias citocinas pró ou anti inflamatórias. A mensuração dos níveis de citocinas se tornou um mecanismo eficiente para detecção e monitoramento destes processos. Devido aos seus baixos níveis plasmáticos (pg/mL), ensaios por imunoabsorção (ELISA) se tornaram estratégias interessantes para a determinação de concentrações de citocinas, porém ainda com algumas limitações. Recentemente, ensaios com base no sistema Luminex aumentou a eficiência da detecção e permitiu a mensuração de mais uma citocina simultaneamente na mesma amostra. No entanto, este sistema ainda é a base de anticorpos e dependente da alta qualidade de anticorpos bem caracterizados e optimizados. Este projeto tem como objetivo desenvolver um método para quantificação de citocinas plasmáticas através do monitoramento múltiplo (MRM) de diferentes moléculas pela espectrometria de massas (MS). A técnica MRM MS é independente de anticorpos e pode ser aplicada a qualquer peptídeo ou proteína de complexos fluidos tal como o plasma sanguíneo. O desafio, como sempre, para detecção de proteínas de baixos níveis em material biológico, é o processamento destas amostras e a sensibilidade do equipamento para assegurar a detecção dos alvos. O benefício deste tipo de abordagem é o número de proteínas detectáveis simultaneamente sem a necessidade de anticorpos e outros reagentes dispendiosos, mantendo alta sensibilidade e seletividade em alta resolução. Outra grande vantagem desta abordagem é possibilidade de ser aplicada para qualquer tipo de material biológico, ocupando grande proporção e valor entre as biotecnias utilizadas atualmente. (AU)