Miniaturizaçâo do ensaio Salmonella/microssoma em microssuspensão

Resumo

O ensaio Salmonela/microssoma também conhecido como teste de Ames vem sendo amplamente empregado na avaliação da mutageniciade de compostos químicos e amostras ambientais. O formato tradicional do ensaio Salmonella/microssoma consiste na contagem do número de colônias que sofreram reversão de uma mutação em placas de petri após a exposição à amostra teste. A miniaturização de ensaios toxicológicos vem sendo uma tendência em atendimento ao conceito dos 3R (Replacement, Reduction and Refinement). Diferentes tentativas para miniaturizar o teste de Ames foram desenvolvidos tanto em meios sólidos como em meio líquido. Na área ambiental a versão do ensaio em microssuspensão (teste de Kado) vem sendo muito utilizada por utilizar menor quantidade de amostra que o ensaio convencional. Porém nesse teste a quantidade de meio de cultura empregado não foi modificada levando ao uso de grande quantidade de insumos. Portanto, o trabalho aqui proposto tem como objetivo a miniaturização do teste de Kado baseado em um protocolo recente que propôs a miniaturização do ensaio Salmonella/microssoma convencional. Essa técnica substituirá as placas de petri convencionais por microplacas de 24 orifícios. Para validar o método serão testados compostos puros em três diferentes linhagens com taxas de reversões espontâneas diferentes e os resultados serão comparados com o teste de Kado que ocorrerá simultaneamente. Diferentes condições experimentais serão avaliadas e os resultados serão analisados estatisticamente. Espera-se obter um protocolo que ofereça resultados comparáveis com o teste de Kado, com a redução de 20 vezes tanto do volume de amostra como dos volumes de meios de cultura e outros insumos empregados no ensaio.