Influência de Lactobacillus reuteri sobre infecção com Porphyromonas gingivalis em modelo de invertebrado

Resumo

A doença periodontal é uma inflamação crônica multifatorial, que tem como fatores etiológicos a instalação e acúmulo de bactérias Gram-negativas como Porphyromonas gingivalis, associados à susceptibilidade do hospedeiro. Novas terapias têm sido testadas, com foco principal na modulação da resposta do hospedeiro e estudos recentes mostram que alguns probióticos, como o Lactobacillus reuteri, são benéficos na saúde oral, reduzindo indicadores de doença periodontal. O objetivo deste estudo é analisar os efeitos do Lactobacillus reuteri vivo, morto e seus produtos (sobrenadante) sobre a infecção por Porphyromonas gingivallis, bactéria fortemente associada à doença periodontal, no modelo de invertebrado Galleria mellonella. Antes do estudo da interação de P. gingivalis e L. reuteri, será realizada uma análise da susceptibilidade de G. mellonella à infecção por esses micro-organismos para determinação da concentração subletal a ser utilizada nos experimentos. Para o teste de sobrevivência de G. mellonella, suspensões de P. gingivalis e/ou de L. reuteri serão injetadas nas larvas. Os animais serão acondicionados em placas de Petri e incubados a 37°C no escuro. Diariamente, durante 7 dias, o número de larvas mortas será anotado. Para avaliação da densidade hemocitária, três larvas de cada grupo serão incubadas em estufa bacteriológica a 37oC durante 3 horas após a infecção. A seguir, a hemolinfa será removida, e as células hemocitárias serão contadas utilizando um hemocitômetro. Para os experimentos de sobrevivência em G. mellonella será realizada a curva de sobrevivência e estimativa das diferenças pelo método de Log-rank (Mantel-Cox). Para análise estatística da contagem de hemócitos será aplicado o teste ANOVA ou Kruskal Wallis, dependendo da normalidade da amostra. Em todos os testes, será considerado nível de significância de 5%. (AU)