Treinamento científico em Proteômica: Aplicação de abordagens proteomicas para avaliar o impacto da criopreservação sobre o nível de expressão proteica em células-tronco mesenquimais de equinos.

Resumo

A vida é dependente de proteínas; cada passo da geração celular, desde replicação do material genético até a senescência e morte, depende da correta função de diversas proteínas, o que demonstra e justifica a importância do estudo destas biomoléculas. A proteômica pode ser definida como a análise qualitativa e quantitativa direta do conjunto de proteínas presentes em um organismo, tecido ou célula sob um dado conjunto de condições fisiológicas e ambientais. Recentes avanços nos espectômetros de massas e cromatografia liquida tem proporcionando inúmeras abordagens nos estudos de proteômica, incluindo as relacionadas a pesquisas básicas e clínicas envolvendo as células-tronco. Nesse contexto, a Dr. Eliandre Oliveira Cacheado acumula grande experiência em análise proteômica, sendo a líder da "Proteomics Platform of the Barcelona Science Park (Parc Científic de Barcelona, PCB), renomado centro in Barcelona, Espanha desde 2002. Adicionalmente, a pesquisadora também é responsável e colaboradora de projetos da Comissão Européia (ShockOmics e Heals), além de possuir publicações em periódicos renomados na área de proteômica, tais como "Proteomics and Journal of Proteome Research que apresentam elevado fator de impacto (JCR). A supervisão da pesquisadora no estágio será de grande aprendizado e aprimoramento para o pós doutorado, pois além do desenvolvimento do projeto proposto, ele poderá acompanhar e participar de projetos da Comissão Européia (ShockOmics e Heals) conduzidos por um grupo com grande experiência em análise proteômica. O estágio possibilitará treinamento científico em: (1) preparação de amostras; (2) identificação de proteínas por meio de digestão enzimática, análise com alta resolução de espectometria de massa(LC-MS/MS) e busca no banco de dados usando diferentes fonte de pesquisa; (3) identificação relativa e quantitativa do nível de proteína por LC-MS/MS e (4) ferramentas de bioinformática. A experiência acumulada com o treinamento científico irá melhorar a qualidade e internacionalização do nosso projeto e de pesquisas futuras. Além disso, a supervisão da Dr Eliandre, a colaboração da sua equipe e a excelente infraestrutura da PCB contribuirão diretamente para o aprimoramento técnico da análise proteômica das células-tronco mesenquimais do cordão umbilical (CTMs-CU) e medula óssea (CTMs-MO) de equinos a fresco e criopreservadas proposto no projeto de pós doutorado intitulado "Estudo comparativo do efeito da criopreservação sobre as propriedades biológicas das células-tronco mesenquimais provenientes da matriz do cordão umbilical e medula óssea de equinos ". Para isso, amostras de lisados celulares (extratos proteicos) obtidos de CTMs-MO e CTMs-CU equino a fresco e criopreservadas com diferentes meios de congelação serão submetidas a redução, alquilação, digestão triptica e, posterior análise LC-MS/MS e análise de dados para identificação e quantificação proteica.