Modular hipertermoestável endo-beta-1,4-mananase: determinação da estrutura tridimensional do domínio central e seu papel na termoestabilização global da enzima.

Resumo

A hidrólise enzimática completa dos polissacarídeos de manana requer três tipos de enzimas trabalhando sinergicamente, sendo elas: ²-mananase, ²-manosidase e ²-glicosidase. A bactéria hipertermófila Thermotoga petrophila (TpMan) produz a enzima endo-²-1,4-mananase, a qual é composta de um domínio catalítico (GH5) e um domínio de ligação ao carboidrato conectados por um linker. A estrutura tridimensional do domínio catalítico GH5 já foi determinada, entretanto, até o momento, não há estrutura tridimensional disponível para a proteína completa (TpMan). Recentemente, nós reportamos o primeiro modelo de baixa resolução para a TpMan completa e demonstramos que o linker é um domínio compacto. Neste projeto de pesquisa, como parte da continua investigação da TpMan, nós propomos determinar a estrutura tridimensional da proteína completa (TpMan) e/ou do domínio central (linker) usando cristalografia de raios X. Até o momento, não obtivemos sucesso em nossas tentativas anteriores de cristalização da proteína completa (TpMan). Assim, um estágio no exterior em um centro de pesquisa como o Institut de Biologie Structurale - Grenoble/France com grande experiência em cristalografia de raios X, deverá ser certamente importante para determinação da estrutura da TpMan.